牛附红细胞体荧光定量PCR检测引物、探针及检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106119401A(43)申请公布日2016.11.16(21)申请号201610754794.X(22)申请日2016.08.29(71)申请人广东温氏食品集团股份有限公司地址527400广东省云浮市新兴县新城镇东堤北路9号(72)发明人卢围廖承球宋延华潘永飞郝建伟王东东(74)专利代理机构广州番禺容大专利代理事务所(普通合伙)44326代理人刘新年(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表3页附图2页(54)发明名称牛附红细胞体荧光定量PCR检测引物、探针及检测试剂盒(57)摘要本发明公开了一种牛附红细胞体荧光定量PCR检测引物、探针及检测试剂盒，所述引物基因序列为SEQIDNo:1和SEQIDNo:2；所述探针的基因序列为SEQIDNo:3；所述试剂盒包含基因序列为SEQIDNo:1和基因序列为SEQIDNo:2的引物和基因序列为SEQIDNo:3的探针。本发明所提供的牛附红细胞体荧光定量PCR检测引物、探针及检测试剂盒，使牛附红细胞体病原的检测操作简便，特异性、敏感性和重复性良好，能更准确、快速地检测出样本中的牛附红细胞体。CN106119401ACN106119401A权利要求书1/1页1.一种牛附红细胞体荧光定量PCR检测引物，其特征在于，所述引物基因序列为SEQIDNo:1和SEQIDNo:2。2.一种牛附红细胞体荧光定量PCR检测探针，其特征在于，所述探针基因序列为SEQIDNo:3。3.根据权利要求2所述的检测探针，其特征在于，所述探针的3’端结合荧光淬灭基团，探针P的5’端结合荧光报告基团。4.根据权利要求3所述的检测探针，其特征在于，所述探针的荧光淬灭基团为TAMRA。5.根据权利要求3所述的检测探针，其特征在于，所述探针的荧光报告基团FAM。6.一种牛附红细胞体荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的引物和权利要求2-5任一所述的探针。2CN106119401A说明书1/5页牛附红细胞体荧光定量PCR检测引物、探针及检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及分子生物学应用领域，具体涉及一种牛附红细胞体荧光定量PCR检测引物、探针及检测试剂盒。背景技术[0002]牛附红细胞体病是由温氏附红细胞体(Mycoplasmawenyonii)寄生于牛血浆、红细胞及骨髓表面等部位而引起的一种人兽共患病，本病可引发牛黄疸、贫血、发热、呼吸、消化和繁殖障碍等(张守发，张国宏，宋建臣.牛附红细胞体体外培养试验[J].中国兽医科技，2002，32(8)：27—29)。自张汝南等(张汝南，罗富贵，黄桂英，等.马、牛、羊附红细胞体的发现与虫体检验法[J].兽医科技杂志。1983，9；24—26.)报道该病以来，我国多地检测出该病的流行(陈启军，尹继剐，刘明远.附红细胞体及附红细胞体病[J].中国兽医学报，2006，26(4)：460—464)。[0003]目前，常用的牛附红细胞体检测方法有如下方法：(1)牛附红细胞体血液镜检：通过采集疑似牛附红细胞体发病牛血液，通过显微镜观察的方式确诊。(2)Elisa抗体检测方法:它的原理是牛感染牛附红细胞体后产生抗体，通过抗体的检测确定是否感染牛附红细胞体。[0004]现有方法存在以下缺点：(1)牛附红细胞体血液镜检：该方法为经典的病原学诊断方法，但采用本法检测对检测人员的经验有较高要求，且容易出现假阳性和假阴性结果，该方法只能为辅助性诊断方法(黄占欣.索勋，秦建华，等.牛附红细胞体病双抗体夹心ELISA诊断方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医。2007,10:11-13.)，不能很好的满足现代化养殖快速有效的病原学检测；(2)Elisa抗体检测方法：该方法的前提是感染牛附红细胞体并产生抗体，由于从感染牛附红细胞体到产生抗体需要一定的时间，这对牛附红细胞体的检测在时间上有一定的局限性，不能及时准确的检测到牛附红细胞体血液镜检；另外，之前感染过牛附红细胞体的牛，后续抗体会在一定时间内持续存在，即使当牛体内没有牛附红细胞体时也会检测到抗体，抗体检测结果阳性也无法说明牛体内是否存在牛附红细胞体病原。[0005]由此可见，现有技术还存在不足。发明内容[0006]有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种牛附红细胞体荧光定量PCR检测引物、探针及检测试剂盒，涉及一种荧光定量PCR的实际应用，通过在牛附红细胞体16SrRNA基因处设计定量PCR引物，并采用探针法建立荧光定量PCR检测方法，更准确、快速地鉴别牛附红细胞体。[0007]本发明是通过下述技术方案实现上述目的：[0008]一种牛附红细胞体荧光定量PCR检测引物，基因序列为：[