一种用于EB病毒荧光定量PCR检测的引物和探针组、及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107164561A(43)申请公布日2017.09.15(21)申请号201710427671.X(22)申请日2017.06.08(71)申请人江苏默乐生物科技股份有限公司地址225300江苏省泰州市医药高新区陶弘景路R19栋(72)发明人陈文铎(74)专利代理机构广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙)44288代理人胡拥军(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图2页(54)发明名称一种用于EB病毒荧光定量PCR检测的引物和探针组、及试剂盒(57)摘要本发明公开了一种用于EB病毒荧光定量PCR检测的引物和探针组、及试剂盒；引物和探针组包括上游引物，如SEQIDNO.1所示；下游引物，如SEQIDNO.2所示；探针，如SEQIDNO.3所示；探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；试剂盒包括：核酸提取液、红细胞裂解液、PCR反应液、混合酶液、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品和阳性标准品；该试剂盒通过特异性的引物和探针、在阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品的监控下，与阳性标准品进行同步测定，测得的结果具有灵敏度高、准确度高的特点。CN107164561ACN107164561A权利要求书1/1页1.一种用于EB病毒荧光定量PCR检测的引物和探针组，其特征在于，包括，上游引物EB-F：5’CCGGTGTGTTCGTATATGGAG3’，如SEQIDNO.1所示；下游引物EB-R：5’GGGAGACGACTCAATGGTGTA3’，如SEQIDNO.2所示；探针EB-P：5’TGCCCTTGCTATTCCACAATGTCGTCTT3’，如SEQIDNO.3所示；探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团。2.如权利要求1所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的引物和探针组，其特征在于，所述引物和探针根据EB病毒的基因组序列中的靶片段进行设计，该靶片段的序列如SEQIDNO.4所示。3.一种用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，包括：核酸提取液、红细胞裂解液、PCR反应液、混合酶液、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品和阳性标准品；所述PCR反应液包括引物和探针；所述引物为：上游引物EB-F：5’CCGGTGTGTTCGTATATGGAG3’，如SEQIDNO.1所示；下游引物EB-R：5’GGGAGACGACTCAATGGTGTA3’，如SEQIDNO.2所示；所述探针为：EB-P：5’TGCCCTTGCTATTCCACAATGTCGTCTT3’，如SEQIDNO.3所示；探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；所述阴性质控品包括不含EB病毒DNA片段的重组质粒；所述临界阳性质控品和强阳性质控品均包括含有EB病毒DNA片段的重组质粒；所述阳性标准品包括含有EB靶片段的重组质粒，该靶片段的序列如SEQIDNO.4所示。4.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取液包括体积百分比0.1-1％的NP-40和1-10％的chelex-100。5.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述红细胞裂解液包括质量百分浓度20-50％的蔗糖和体积百分比1-5％的TritonX-100。6.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括浓度为0.2-0.4mM含dUTP的dNTP、2-7mM的MgCl2、5-20mM的KCl、0.2-1μM的引物和0.1-0.3μM的探针。7.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述混合酶液包括1-5U的HotstartTaq酶和0.1-0.5U的UNG酶。8.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品包括：阳性标准品1：含有浓度为1.0×104copy/mL的EB靶片段的重组质粒；阳性标准品2：含有浓度为1.0×105copy/mL的EB靶片段的重组质粒；阳性标准品3：含有浓度为1.0×106copy/mL的EB靶片段的重组质粒；阳性标准品4：含有浓度为1.0×107copy/mL的EB靶片段的重组质粒。9.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进行PCR的反应体系为：42℃，2min；94℃，2min；94℃，10sec，58℃，1min，45个循环；数据的采集定在58℃。2CN107164561A说明书1/5页一种用于E