用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法及其卵黄抗体的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106279349A(43)申请公布日2017.01.04(21)申请号201610797677.1(22)申请日2016.08.31(71)申请人广东工业大学地址510062广东省广州市越秀区东风东路729号(72)发明人赵肃清胡青青焦洛莹崔锡平夏娜娜吕瑞梁雨欣沈定(74)专利代理机构广东广信君达律师事务所44329代理人张燕玲杨晓松(51)Int.Cl.C07K1/14(2006.01)C07K16/14(2006.01)C07K16/02(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法及其卵黄抗体的制备方法(57)摘要本发明属于生物制药技术，公开了一种用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法及其卵黄抗体的制备方法。具体制备方法包括以下：用SDA固体培养基培养皮肤癣真菌，然后接种到SDA液体培养基中大量培养；过滤得到菌丝，用液氮低温研磨；加入蜗牛酶酶解细胞壁，得到的沉淀加入裂解液，充分作用后，上层液用PBS透析，即为皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原。再利用制备的细胞浆蛋白作为抗原，免疫母鸡，得到高效价的抗体，为皮肤癣疾病的预防与治疗提供了新思路。CN106279349ACN106279349A权利要求书1/1页1.一种用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法，其特征在于包括以下步骤：(1)选取红色毛癣菌或须癣毛癣菌，先固体培养后采用液体培养；(2)液体培养后进行冲洗和离心，得到的菌丝经过液氮研磨，酶解细胞壁，利用裂解液提取真菌的细胞浆蛋白，离心得到上清液；(3)将上清液透析后获得皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原。2.根据权利要求1所述的一种用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法，其特征在于：步骤(1)所述固体培养是采用SDA固体培养基；所述液体培养基是采用SDA液体培养基。3.根据权利要求1所述的一种用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法，其特征在于：步骤(2)所述酶解细胞壁是采用蜗牛酶破壁，以及使用二硫苏糖醇还原蛋白质中二硫键；所述利用裂解液提取真菌的细胞浆蛋白的过程中使用冰浴，所述裂解液含有8M的尿素和1M的碳酸氢钠。4.根据权利要求1所述的一种用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法，其特征在于：步骤(3)所述透析是采用PBS透析三天。5.一种根据权利要求1-4任一项所述提取方法提取得到的用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原。6.一种利用权利要求5所述的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原制备卵黄抗体的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)选取20周龄产蛋母鸡；将皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原用PBS缓冲液稀释成1mg/ml的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原溶液；将皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原溶液与弗氏完全佐剂按照等体积混合乳化，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5ml；首次免疫两周后进行第一次加强免疫，用等体积的弗氏不完全佐剂与皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原溶液混合乳化，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5ml，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫4次，从第一次加强免疫开始收集免疫鸡蛋，并存放于4℃；(2)将获得的免疫鸡蛋用酒精消毒，破壳收集蛋黄，与冻存蒸馏水按照体积比为1:9混匀，离心获得水溶性成分，采用PEG6000进行沉淀获得卵黄抗体干粉，于-20℃保存。7.一种根据权利要求6所述的方法制备得到的卵黄抗体。2CN106279349A说明书1/3页用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法及其卵黄抗体的制备方法技术领域[0001]本发明属于生物制药技术，特别涉及一种用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法及其卵黄抗体的制备。背景技术[0002]皮肤癣菌是浅部真菌病的主要病原菌，主要侵犯皮肤、毛发及指(趾)甲，寄生或腐生于表皮角质、毛发和甲板的角蛋白组织中。皮肤癣菌对机体损害程度由宿主对真菌代谢产物的反应强度、致病菌种与菌株致病力强弱、感染部位和外界环境因素决定的。常引起感染的皮肤癣菌主要有须癣毛癣菌、红色毛癣菌、犬小孢子菌、铁锈色小孢子菌、絮状表皮癣菌等。皮肤癣菌病包括体股癣、手足癣、头癣。手足癣分为三种类型：鳞屑角化型、水疱型、擦烂型。由真菌感染引起的皮肤癣疾病往往病情顽固，反复发作。给患者带来生理与心理的双重折磨。[0003]临床上对于这类真菌性感染疾病的治疗多为抗真菌的抗生素药物或者一些中药提取的抗真菌成分。然而，利用抗生素类药物的治疗会引起耐药菌株的不断出现，真菌疾病的高频率复发，且副作用较大。利用中药药物的治疗效果缓慢，且复发率高，效果并不显著。这也促使科研人员不断寻找新的高效的廉价的安全的抗真菌药物。[0004]卵黄抗体