抗产气荚膜梭菌卵黄抗体及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115477699A(43)申请公布日2022.12.16(21)申请号202211270870.1A23K20/147(2016.01)(22)申请日2022.10.14(71)申请人华中农业大学地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人谷长勤董庆庆谢长清张策程国富张万坡胡薛英(74)专利代理机构武汉宇晨专利事务所(普通合伙)42001专利代理师江丽丽(51)Int.Cl.C07K16/12(2006.01)C07K16/02(2006.01)A61K39/40(2006.01)A61P31/04(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图4页(54)发明名称抗产气荚膜梭菌卵黄抗体及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种抗产气荚膜梭菌卵黄抗体及其制备方法，以灭活产气荚膜梭菌或其类毒素为抗原对蛋鸡进行免疫，收集免疫后的鸡蛋，从鸡蛋卵黄中提取卵黄抗体。灭活产气荚膜梭菌抗原和类毒素免疫产蛋母鸡制备的卵黄抗体在减轻亚临床鸡坏死性肠炎导致的体重降低、肠道病变和肠绒毛高度降低、隐窝深度增加方面具有良好的效果，可用于制备预防或治疗产气荚膜梭菌引起的鸡坏死性肠炎的药物或添加剂。CN115477699ACN115477699A权利要求书1/1页1.一种抗产气荚膜梭菌卵黄抗体，其特征在于，以灭活的产气荚膜梭菌或产气荚膜梭菌类毒素为抗原对蛋鸡进行免疫，收集免疫后的鸡蛋，从鸡蛋卵黄中提取卵黄抗体。2.一种抗产气荚膜梭菌卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）抗原制备：以灭活的产气荚膜梭菌作为抗原，或者将产气荚膜梭菌培养液的上清灭活后得到类毒素抗原；（2）免疫蛋鸡：将所述的灭活产气荚膜梭菌抗原或类毒素抗原分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂混合，制成弗氏完全佐剂疫苗和弗氏不完全佐剂疫苗；对蛋鸡进行免疫，共免疫4次，每次间隔2周免疫1次，初次免疫用弗氏完全佐剂疫苗，强化免疫用弗氏不完全佐剂疫苗；（3）提取卵黄抗体：首免后每隔一周收集一次鸡蛋，从蛋黄液中提取卵黄抗体。3.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述的卵黄抗体提取方法：在蛋黄液中加入3倍于蛋黄液体积的含有3.5%PEG6000溶液，搅拌后取上清液，在上清液中加入终浓度12%的PEG6000，沉淀即为卵黄抗体提取物。4.权利要求1所述的抗产气荚膜梭菌卵黄抗体在制备预防或治疗产气荚膜梭菌引起的鸡坏死性肠炎的药物或添加剂中的应用。2CN115477699A说明书1/9页抗产气荚膜梭菌卵黄抗体及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种抗产气荚膜梭菌卵黄抗体及其制备方法和应用。背景技术[0002]产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens，C.perfringens)是一种归于芽胞杆菌科，梭状芽孢杆菌属的革兰氏阳性大杆菌，该菌是人和动物胃肠道中的良性共生菌，在自然环境中也有广泛分布，在污水、土壤、饲料、动物产品以及人和动物的肠道和粪便中都能检测到。当机体的肠道微环境遭到破坏时，致病性产气荚膜梭菌会大量增殖，引起人和多种动物的疾病，危害人和动物健康。[0003]鸡坏死性肠炎(NecroticEnteritis，NE)是家禽养殖过程中常见多发的一种细菌性疾病，由肉鸡肠道中致病性的产气荚膜梭菌大量增殖引起，特征为肝脏肿大，肠黏膜出血和麸皮样坏死。在表现形式上有临床型和亚临床型两种：临床型可造成家禽突发死亡，病程较短，死亡率较高，常常在接连的几天内每天有1％的死亡，累计死亡率可达10％‑40％；亚临床形式一般不会引起死亡，主要导致肠道黏膜的慢性损伤，家禽对营养物质的消化吸收减少，料重比增加，体重增长速度降低，增加养殖成本。目前该病在肉鸡、蛋鸡、鹌鹑和火鸡等多种禽类中都有相关报道。预防该病的传统方式是在饲料中添加抗生素，但是，随着抗生素滥用导致的细菌耐药性问题被重视，现在各国都相继宣布限制抗生素的使用。因此，现在急需一种新型、安全、无害的产品来替代抗生素用于防治鸡坏死性肠炎。[0004]卵黄抗体(Immunoglobulinofyolk，IgY)是家禽在受到抗原刺激后，法氏囊中的浆细胞分泌特异性免疫球蛋白，血清中的IgG抗体在流经卵巢时，在卵黄中蓄积形成，是禽类、两栖类和爬行类动物所特有的一种抗体。与动物传统的采血获取血清中IgG抗体的方法相比，IgY具有以下几个优点：①生产成本低、抗体产量高，每个鸡蛋中卵黄抗体的含量约为100mg，每年每只鸡能产生20g左右的卵黄抗体，抗体产量是兔子的5倍；②对动物损伤小、符合动物福利保护原则，不需要采血，直接获取鸡蛋不会对免疫动物造成二次伤害；③安全无害、性质稳定，对酸碱环境有较强的耐受性；④与哺乳动物亲缘关系较远，不与哺乳动