一种可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109010927A(43)申请公布日2018.12.18(21)申请号201810890026.6(22)申请日2018.08.07(71)申请人中国人民解放军第二军医大学地址200433上海市杨浦区翔殷路800号(72)发明人刘晓红吴昊徐志云夏翠萍(74)专利代理机构上海德昭知识产权代理有限公司31204代理人郁旦蓉(51)Int.Cl.A61L27/56(2006.01)A61L27/50(2006.01)A61L27/54(2006.01)A61L27/36(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法(57)摘要本发明提供了一种可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，具有这样的特征，包括以下步骤：步骤一，将牛心包置于非离子型去污剂缓冲液中真空冷冻2～6h；步骤二，将冷冻后的牛心包水浴溶解；步骤三，重复步骤一与步骤二1～10次；步骤四，将冻融后的牛心包置于非离子型去污剂缓冲液中在30～50℃震荡28～96h；步骤五，用无菌去离子水对牛心包清洗12～48h；步骤六，用磷酸盐溶液对牛心包荡清洗48～96h得到牛心包的脱细胞基质；步骤七，将脱细胞基质浸没在生物活性因子琼脂糖材料中20min～2h得到可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质。CN109010927ACN109010927A权利要求书1/2页1.一种可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，在真空条件下，将牛心包置于非离子型去污剂缓冲液中冷冻2～6h；步骤二，冷冻结束后，将冷冻后的所述牛心包水浴溶解；步骤三，重复步骤一与步骤二1～10次，将所述牛心包进行多次冻融；步骤四，将多次冻融后的所述牛心包放置于非离子型去污剂缓冲液中，并在30～50℃摇床中处理震荡28～96h；步骤五，用无菌去离子水对震荡后的所述牛心包震荡清洗12～48h；步骤六，用磷酸盐溶液对无菌去离子水清洗后的所述牛心包荡清洗48～96h后，得到牛心包的脱细胞基质；步骤七，将所述脱细胞基质浸没在生物活性因子琼脂糖材料中20min～2h，得到可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质，其中，所述非离子型去污剂缓冲液包括：Tris缓冲液、非离子型去污剂以及脱氧胆酸钠，所述Tris缓冲液的浓度范围为8～12mmol/L，PH值为7.4～7.8，所述非离子型去污剂在所述Tris缓冲液的体积分数范围为0.8％～1.5％W/V，所述脱氧胆酸钠在所述Tris缓冲液的体积分数范围为0～0.8％W/V。2.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：其中，在步骤七中，所述生物活性因子琼脂糖材料中的生物活性因子为具有生物活性的生长因子。3.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：其中，在步骤七中，所述生物活性因子琼脂糖材料中的生物活性因子的浓度范围为2.0～12.0μg/ml。4.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：其中，所述去污剂为聚乙二醇辛基苯基醚。5.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：其中，在步骤二中，所述水浴的温度为30～50℃。6.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：其中，所述Tris缓冲液的浓度为10mmol/L，PH值为7.6。7.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：其中，在步骤一中，所述牛心包的冷冻时间为4～5h。8.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：2CN109010927A权利要求书2/2页其中，在步骤五中，所述去离子水的震荡清洗时间为24～36h。9.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：其中，在步骤六中，所述磷酸盐溶液的震荡清洗时间为72h。3CN109010927A说明书1/5页一种可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法技术领域[0001]本发明涉及组织工程领域，具体涉及一种可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法。背景技术[0002]组织工程是将活细胞接种在组织基质上，制造出一种与受者组织相容性好，无免疫原性、不需抗凝、耐久性强的生物材料。其中，天然基质材料是组织工程研究的重要内容之一。理想的天然基质材料应具备以下优点：(1)良好的组织相容性，无生物毒性；(2)具有三维立体结构，材料需呈多孔海绵状，有利于细胞粘附浸润，以及营养物质的深入和代谢产物的排泄；(3)富含生物活