貉细小病毒株及其应用、貉细小病毒灭活疫苗及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108690834A(43)申请公布日2018.10.23(21)申请号201810552058.5A61P31/20(2006.01)(22)申请日2018.05.31A61P1/00(2006.01)C12R1/93(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNo.154832018.03.07(71)申请人中国农业科学院特产研究所地址130112吉林省长春市净月经济开发区聚业大街4899号(72)发明人罗国良程悦宁王振军冯二凯易立程世鹏郭利(74)专利代理机构哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司23211代理人邓宇(51)Int.Cl.C12N7/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页A61K39/23(2006.01)序列表2页(54)发明名称貉细小病毒株及其应用、貉细小病毒灭活疫苗及其制备方法(57)摘要貉细小病毒株及其应用、貉细小病毒灭活疫苗及其制备方法，属于疫苗制备技术领域。本发明针对目前貉细小病毒灭活疫苗安全性以及免疫效果差的问题，提供了一种貉细小病毒株，所述病毒株为貉细小病毒RDPV-HeB17毒株，保藏编号为：CGMCCNO.15483。将RDPV-HeB17毒株接种于F81细胞，培养至细胞出现病变后，冻存即成病毒液，病毒经BEI灭活后，加入氢氧化铝胶制成灭活疫苗，可用于预防貉细小病毒性肠炎。CN108690834ACN108690834A权利要求书1/1页1.一种貉细小病毒株，其特征在于，为貉细小病毒RDPV-HeB17毒株，保藏编号为：CGMCCNO.15483。2.权利要求1所述的貉细小病毒株在制备貉细小病毒灭活疫苗中的应用。3.一种貉细小病毒灭活疫苗,其特征在于，所述疫苗含有灭活后的貉细小病毒RDPV-HeB17毒株。4.一种权利要求3所述的貉细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:1)F81细胞按正常传代后，接种RDPV-HeB17毒株，培养72-96h收获细胞培养液，冻融即成病毒液；2)将病毒液经二乙烯亚胺BEI灭活后，加入氢氧化铝胶制成貉细小病毒灭活疫苗。5.根据权利要求4所述的貉细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤1)所述F81细胞培养于MEM培养基中，在37℃条件下培养3天后进行传代培养。6.根据权利要求4所述的貉细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤1)所述RDPV-HeB17毒株是按照MOI为0.1～0.3的比例接种至F81细胞上，然后在37℃条件下培养。7.根据权利要求4所述的貉细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤1)所述病6.0毒液病毒含量≥10TCID50/ml。8.根据权利要求4所述的貉细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤2)所述二乙烯亚胺在病毒液中的终浓度为0.003mol/L。9.根据权利要求4所述的貉细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤2)所述的灭活，灭活温度为35℃，时间为24h。10.根据权利要求4所述的貉细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤2)所述氢氧化铝在貉细小病毒灭活疫苗中的终浓度为5％，所述浓度为质量分数。2CN108690834A说明书1/4页貉细小病毒株及其应用、貉细小病毒灭活疫苗及其制备方法技术领域[0001]本发明属于疫苗制备技术领域，具体涉及一种貉细小病毒株及其应用、貉细小病毒灭活疫苗及其制备方法。背景技术[0002]貉细小病毒病又名貉细小病毒性肠炎，是貉的一种急性、高度接触性传染病，具有较高的发病率和死亡率，常呈地方性和季节性流行，主要通过消化道和呼吸道传播，是貉的主要传染病。[0003]1984年，貉细小病毒性肠炎在我国黑龙江省首次报道。1988年，夏咸柱等从不同地区肠炎病貉分离出3株貉细小病毒，2008年，刘双翼等在大庆貉养殖厂分离1株貉细小病毒，2009年闫喜军等在辽宁省、河北省等地分离到6株貉细小病毒。近年来，貉细小病毒性肠炎的流行愈演愈烈。目前，国内大多采用水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗或犬细小病毒弱毒苗，虽有一定的免疫交叉保护作用，但存在交叉保护抗体不高、免疫原性差等缺点。[0004]因此，开发安全、有效的貉细小病毒是预防貉细小病毒性肠炎的有效方法，具有广阔的市场途径。发明内容[0005]本发明针对目前貉细小病毒灭活疫苗安全性以及免疫效果差的问题，提供了一种貉细小病毒株，所述病毒株为貉细小病毒RDPV-HeB17毒株，保藏编号为：CGMCCNO.15483。[0006]本发明所述的貉细小病毒株可用于制备貉细小病毒灭活疫苗，所述疫苗含有灭活后的貉细小病毒RDPV-HeB17毒株。[0007]上述貉细小病毒灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤:[0008]1)F81细胞按正常传代后，接种RDPV-He