猪轮状病毒毒株及其制备的灭活疫苗和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107988170A(43)申请公布日2018.05.04(21)申请号201711107884.0A61K39/15(2006.01)(22)申请日2017.11.10A61P31/14(2006.01)C12R1/93(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNO.137922017.04.14(71)申请人吉林正业生物制品股份有限公司地址132101吉林省吉林市经济技术开发区九站联盟街1号(72)发明人王国辉董雅文贾小营张微杨泽斌李长艳朱俊辉于志刚王英祺廉唯王石何玉友(74)专利代理机构北京思元知识产权代理事务所(普通合伙)11598代理人余光军霍雪梅(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书7页C12N7/00(2006.01)序列表1页附图1页(54)发明名称猪轮状病毒毒株及其制备的灭活疫苗和应用(57)摘要本发明公开了一株猪轮状病毒毒株及其制备的灭活疫苗和应用。本发明首先公开了一株分离的猪轮状病毒zyh25株，其微生物保藏编号为CGMCCNo.13792。本发明进一步公开了所述猪轮状病毒zyh25株在制备防治猪轮状病毒病的疫苗中的应用。本发明还公开了一种防治猪轮状病毒病的疫苗组合物，包括：预防或治疗上有效量的灭活的所述猪轮状病毒zyh25株和药学上可接受的佐剂。本发明所分离的猪轮状病毒zyh25株作为疫苗株具有良好的免疫原性，免疫动物后能产生较高的抗体水平，且能够耐受强毒株攻击。本发明所述猪轮状病毒zyh25株能够进行无血清全悬浮连续生产，制备的灭活疫苗具有生产成本低、产品批间差异小等优点。CN107988170ACN107988170A权利要求书1/1页1.一株分离的猪轮状病毒zyh25株，其特征在于，其微生物保藏编号为：CGMCCNo.13792。2.权利要求1所述的猪轮状病毒zyh25株在制备防治猪轮状病毒病的疫苗中的应用。3.一种防治猪轮状病毒病的疫苗组合物，其特征在于，包括：预防或治疗上有效量的灭活的权利要求1所述猪轮状病毒zyh25株和药学上可接受的佐剂。4.一种猪轮状病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养权利要求1所述的猪轮状病毒zyh25株，收获病毒液，离心，取上清液；(2)将上清液加入灭活剂进行灭活；(3)将灭活的上清液与佐剂混合，乳化，即得。5.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)用Marc-145细胞培养权利要求1所述的猪轮状病毒zyh25株；优选的，所述培养是将猪轮状病毒zyh25株接种Marc-145细胞进行转瓶培养；或者，将猪轮状病毒zyh25株接种无血清全悬浮培养的Marc-145细胞，进行无血清全悬浮培养；更优选的，所述培养是将猪轮状病毒zyh25株接种无血清全悬浮培养的Marc-145细胞，进行无血清全悬浮培养。6.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述灭活剂为福尔马林；优选的，按照体积比计，所述灭活剂的终浓度为0.1％。7.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述灭活为37℃灭活48h。8.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)按照体积比计，灭活的上清液：佐剂＝1：2.5。9.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述离心为5000r/min离心30min；步骤(3)所述佐剂为油佐剂。10.权利要求4至9任何一项所述制备方法制备得到的猪轮状病毒灭活疫苗。2CN107988170A说明书1/7页猪轮状病毒毒株及其制备的灭活疫苗和应用技术领域[0001]本发明涉及一株分离的猪轮状病毒毒株，还涉及所述猪轮状病毒毒株制备的灭活疫苗及在防治猪轮状病毒感染中的应用，属于猪轮状病毒毒株的分离及应用领域。背景技术[0002]猪轮状病毒(PorcineRotaVirus，PoRV)病是由轮状病毒感染引起的一种仔猪腹泻性疾病。轮状病毒种类很多，具有不同的血清型和基因型，且感染的宿主谱很广，人、鸡、猪、牛、马等动物的幼龄阶段皆有感染发生，主要临床表现为腹泻，并能与其他病原微生物发生协同作用，造成继发感染，从而引起猪群的高发病率和致死率，对各国养猪业的危害很大。[0003]预防猪轮状病毒感染发生与传播的最有效手段是疫苗接种。目前，市售的猪轮状病毒疫苗绝大多数为转瓶培养工艺制备的活疫苗，相对于无血清全悬浮培养工艺而言，其具有用工人数多、生产成本高、培养过程无法实时监测、产品批次之间差异较大、副反应大、安全性差等诸多缺点。因此，分离能够进行无血清全悬浮培养的猪轮状病毒毒株，对于有效预防猪轮状病毒的感染具有重要意义。发明内容[0004]本发明所要解决的第一个技术问题是提供一株分离的猪轮状病毒毒株；[0005]本发明所要解决的第二