一种犬细小病毒蜂胶灭活疫苗及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102657860A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102657860A(43)申请公布日2012.09.12(21)申请号201210130887.7(22)申请日2012.05.01(71)申请人青岛农业大学地址266109山东省青岛市城阳区青岛农业大学动物科技学院生物楼C201(72)发明人单虎杨瑞梅韩先杰黄娟秦晓冰张传美(51)Int.Cl.A61K39/23(2006.01)A61K39/39(2006.01)A61P31/20(2006.01)C12N7/00(2006.01)C12N7/02(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书33页页(54)发明名称一种犬细小病毒蜂胶灭活疫苗及其制备方法(57)摘要本发明提供了一种犬细小病毒蜂胶灭活苗及其制备方法。本发明的实质内容是将犬细小病毒株在F81细胞上进行病毒繁殖，经过收获、灭活，并以蜂胶作为佐剂制备一种犬细小病毒蜂胶灭活疫苗。本疫苗能够有效预防犬源细小病毒病的发生，并能显著减少注射疫苗后的不良反应，为宠物疾病的控制创造条件。CN1026578ACN102657860A权利要求书1/1页1.一种犬细小病毒蜂胶灭活疫苗，其特征在于：犬细小病毒株在F81细胞上进行病毒繁殖，经过收获、灭活，并以蜂胶作为佐剂混合制成灭活苗。2.权利要求1所述的灭活疫苗的制备方法，主要包括如下步骤：1）细小病毒灭活原液的制备；2）蜂胶溶液的制备；3）成品疫苗制备：按每ml疫苗含蜂胶干物质含量为8～15mg标准添加蜂胶溶液搅拌15～20分钟，使其充分混合乳化。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的犬细小病毒灭活原液的制备步骤包括：将生长良好的F81细胞按常规方法传代，待细胞长成80%单层后，倾去生长液，换以含1%毒种的维持液(含2%新生牛血清的MEM)，置36℃继续培养，转瓶转速为8～l0r／h；接种后，每日观察细胞病变，当细胞病变(CPE)达80%左右时即可收获，冻融1次，置-15℃以下冻结保存，待检备用；按病毒液总量的0.2%加入甲醛溶液，充分混匀，置36℃下灭活，待温度升至36℃开始计时，180转/分钟的摇床中不间断摇动，灭活48小时。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，蜂胶液制备由以下步骤完成：选取已知纯度的蜂胶，经破碎后过筛，溶于95%的乙醇溶液，再根据要求配成适当浓度的溶液于4℃下保存备用。5.根据权利要求2-3任一项所述的制备方法，其特征在于，成品疫苗为黄褐色混悬液，密封保存于4-8℃中。6.权利要求1所述的犬细小病毒蜂胶灭活疫苗的用途，主要是用于犬细小病毒病的免疫。2CN102657860A说明书1/3页一种犬细小病毒蜂胶灭活疫苗及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种犬细小病毒蜂胶灭活疫苗及其制备方法，属于兽医生物制品技术领域。背景技术[0002]犬细小病毒（CanineParvovirus，CPV）感染是多发生于犬科动物的一种烈性传染病。临床表现以急性出血性肠炎和非化脓性心肌炎为特征。CPV属细小病毒科，细小病毒属。CPV对多种理化因素和常用消毒剂具有较强的抵抗力。犬感染CPV发病急，死亡率高，常呈暴发性流行；不同年龄、性别、品种的犬均可感染；本病发生没有明显的季节性。[0003]近年来，随着我国工作犬（军犬、警犬、导盲犬等）、实验用犬和宠物犬饲养量的大幅增加，犬细小病毒感染日趋严重，给养业犬带来了重大的经济损失，成为危害养犬业重大疫病之一。本病发病迅速，疫苗免疫接种是预防本病的有效措施。[0004]本发明的目的是制备出一种安全、有效的犬细小病毒蜂胶灭活疫苗，并以蜂胶作为佐剂制备一种犬细小病毒蜂胶灭活疫苗。发明内容[0005]本发明的目的是利用犬细小病毒株作为生产疫苗的毒株，通过在F81细胞在进行病毒繁殖，经过收获、灭活，并以蜂胶作为佐剂制备一种犬细小病毒蜂胶灭活疫苗，以制备一种既能减小犬注射疫苗后的不良反应又能增强犬对该灭活病毒的应答反应。[0006]为达到上述目的，本发明所采用的具体技术方案如下：一种犬细小病毒蜂胶灭活疫苗，犬细小灭活病毒以蜂胶为佐剂而制成的犬细小病毒蜂胶灭活疫苗。[0007]上述犬细小病毒蜂胶灭活疫苗的制备方法，具体步骤如下：（1）犬细小病毒的培养及灭活：将细小病毒生产用疫苗株接种F81细胞36℃培养，当接毒细胞有80%出现病变时，收获病毒细胞培养液，经过0.2%甲醛灭活，180转/分钟的摇床内摇48小时，以制备病毒灭活液；（2）蜂胶液制备；（3）按每ml疫苗含蜂胶干物质含量为8～15mg标准添加蜂胶溶液搅拌15～20分钟，使其充分混合乳化。[0008]进一步地，所述的蜂胶液制备由以下步骤完成：选取已知纯度的蜂胶，经破碎后过筛，溶于95%的乙醇溶液，再根