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本发明提出一种用于抗犬细小病毒的单链抗体、制备方法及其应用,属于基因工程领域,能够解决常规抗体对犬细小病治疗效果不理想的技术问题。其中,用于抗犬细小病毒的单链抗体为耦联信号肽的单链抗体,其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示,核苷酸序列如SEQIDNO.3所示,具体通过以下步骤制备得到:(1)基因合成与表达载体构建;(2)质粒转化与双酶切鉴定;(3)目的蛋白诱导表达;(4)目的蛋白纯化;(5)目的蛋白抗原结合活性、细胞增殖、细胞毒性以及对犬细小病毒抑制效果检测。本发明能够应用于抗犬细小病以及制备抗细小病毒药物制品方面。