一种检测噻虫嗪残留的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111060682A(43)申请公布日2020.04.24(21)申请号201911310426.6G01N33/58(2006.01)(22)申请日2019.12.18(71)申请人河北省农林科学院遗传生理研究所（河北省农林科学院农产品质量安全研究中心）地址050051河北省石家庄市新华区和平西路598号(72)发明人张嘉坤钱训郑振山陈勇达李丽梅张少军(74)专利代理机构石家庄轻拓知识产权代理事务所(普通合伙)13128代理人王占华(51)Int.Cl.G01N33/53(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称一种检测噻虫嗪残留的方法(57)摘要本发明提供了一种检测噻虫嗪残留的方法，属于农药残留检测技术领域。本发明将能量供体UCNPs与噻虫嗪抗体偶联，用能量受体AuNPs标记噻虫嗪抗原。噻虫嗪与抗体UCNPs结合的抗原AuNPs之间发生竞争性免疫反应，利用荧光检测信号计算得到噻虫嗪残留含量。本发明检测噻虫嗪残留的方法，灵敏度高、选择性好、准确度和可靠性高，适用于现场、批量、快速检测。CN111060682ACN111060682A权利要求书1/1页1.一种检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将上转换纳米颗粒与噻虫嗪抗体偶联，得到噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物；(2)用金纳米颗粒标记噻虫嗪抗原，得到噻虫嗪抗原-AuNPs结合物；(3)噻虫嗪与噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物以及噻虫嗪-抗原AuNPs结合物之间发生竞争性免疫反应，利用上转换纳米颗粒与金纳米颗粒之间的内滤波效应获得不同的荧光检测信号值，计算得到噻虫嗪残留量。2.根据权利要求1所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物的制备方法包括：将COOH-UCNPs颗粒用N-N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺在水溶液中震荡活化，得到活性颗粒；将活性颗粒与噻虫嗪抗体于磷酸缓冲液中混合反应，得到噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物。3.根据权利要求2所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物悬浮在储备溶液中，所述储备液为含有1％牛血清白蛋白、0.1％吐温-20和1％海藻糖的0.03MpH7.4的磷酸缓冲液。4.根据权利要求1所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述金纳米颗粒用柠檬酸钠还原法制备。5.根据权利要求4所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述金纳米颗粒的制备方法包括：将氯化金水溶液在冷凝回流条件下加热至沸点，搅拌下加入柠檬酸三钠溶液，当溶液的颜色从深蓝色变为酒红色时，再加热后冷却，得到含有金纳米颗粒的悬浮液。6.根据权利要求1所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述噻虫嗪抗原-AuNPs结合物的制备方法包括：调节胶体金颗粒悬浮液的pH值至8.0，将噻虫嗪抗原加入上述溶液中搅拌孵育，得溶液I；向溶液I中加入含有牛血清白蛋白和聚乙二醇的Tris-HCl溶液混合并搅拌，使溶液I中牛血清白蛋白的终浓度为1％，聚乙二醇的终浓度为1％，继续孵育后，离心得到噻虫嗪抗原-AuNPs结合物。7.根据权利要求1或6所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述噻虫嗪抗原-AuNPs结合物分散在0.05MpH8.5的TrisHCl混合溶液中，所述TrisHCl混合溶液包含1％牛血清白蛋白、1％聚乙二醇和5％蔗糖。8.根据权利要求1所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述利用荧光强度变化值与噻虫嗪浓度之间的关系建立标准曲线，利用标准曲线计算噻虫嗪浓度。2CN111060682A说明书1/6页一种检测噻虫嗪残留的方法技术领域[0001]本发明涉及农药残留检测技术领域，尤其涉及一种检测噻虫嗪残留的方法。背景技术[0002]噻虫嗪(thiamethoxam)是新烟碱类杀虫剂第2代的第1个代表化合物，由瑞士诺华(现先正达)公司1991年开发并于1997年推出上市。噻虫嗪不仅具有触杀、胃毒、内吸活性，而且具有更高的活性、更好的安全性、更广的杀虫谱及作用速度快、持效期长等特点，可选择性抑制昆虫中枢神经系统烟酸乙酰胆碱酯酶受体，进而阻断昆虫中枢神经系统的正常传导，造成害虫出现麻痹死亡。对鳞翅目、鞘翅目、双翅目、尤其是同翅目害虫有高活性，可有效防治各种蚜虫、叶蝉、飞虱类、粉虱、马铃薯甲虫、金龟子幼虫、线虫、地面甲虫、潜叶蛾等害虫及与多种类型化学农药产生抗性的害虫，且与吡虫啉、啶虫脒、烯啶虫胺无交互抗性，被广泛应用于农业和畜牧业。噻虫嗪虽然为低毒杀虫剂(大鼠急性经口LD50：1563mg/kg)，但随着人们环境保护意识的不断加强，农药残留引起的食品安全问题越来越受到人们