检测猪塞内卡病毒A的rRT-RAA引物对和探针、试剂盒及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113801961A(43)申请公布日2021.12.17(21)申请号202110993993.7(22)申请日2021.08.27(71)申请人中国农业大学地址100083北京市海淀区清华东路17号(72)发明人张永宁王文龙涂飞周磊盖新娜韩军郭鑫杨汉春(74)专利代理机构北京兴智翔达知识产权代理有限公司11768代理人张玉梅(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6844(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图5页(54)发明名称检测猪塞内卡病毒A的rRT-RAA引物对和探针、试剂盒及应用(57)摘要本发明属于动物疫病检测技术领域，具体涉及一种可快速、灵敏地检测猪塞内卡病毒A(SenecavirusA，SVA)的rRT‑RAA引物对和探针、试剂盒。本发明所述检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA引物对和探针，针对于猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA检测，筛选出适宜于快速鉴定猪塞内卡病毒AVP2基因的正向引物SVA‑VP2‑F、反向引物SVA‑VP2‑R和探针SVA‑VP2‑P，可实现对SVA进行快速、特异、灵敏、简便地检测，从而弥补现有检测技术的不足，具有广阔的应用前景。CN113801961ACN113801961A权利要求书1/2页1.一种检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA引物对和探针，其特征在于：所述引物对包括用于鉴定猪塞内卡病毒AVP2基因的正向引物SVA‑VP2‑F和反向引物SVA‑VP2‑R，其中所述正向引物SVA‑VP2‑F和反向引物SVA‑VP2‑R的序列如下：正向引物SVA‑VP2‑F：5’‑TACCGAAGAAATGGAAAACTCTGCTGATCG‑3’；反向引物SVA‑VP2‑R：5’‑TGTGCTGCTGGACGGAGGGTCAGATTTGGT‑3’；所述探针SVA‑VP2‑P的序列如下：5’‑GCAACACTGCCATAAACACGCAATCATCACTGGGTGTGTTGTGTGCCTAC‑3’。2.根据权利要求1所述的检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA引物对和探针，其特征在于，所述探针SVA‑VP2‑P自5’端起第31位碱基T标记FAM发光基团，第33位碱基G被四氢呋喃THF代替，第35位碱基T标记BHQ1淬灭基团，3’端进行C3‑spacer阻断修饰；所述探针SVA‑VP2‑P的序列如下：5’‑GCAACACTGCCATAAACACGCAATCATCAC(FAM‑dT)G(THF)G(BHQ1‑dT)GTGTTGTGTGCCTAC[C3‑spacer]‑3’。3.一种检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的rRT‑RAA引物对和探针。4.根据权利要求3所述的检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含适宜于逆转录重组酶介导等温扩增的试剂体系和RT荧光基础反应单元。5.根据权利要求4所述的检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA试剂盒，其特征在于，所述试剂体系包括反应缓冲液、RNase‑FreeddH2O、含有镁离子的缓冲液。6.根据权利要求4或5所述的检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA试剂盒，其特征在于，所述RT荧光基础反应单元包含单链DNA结合蛋白、重组酶、逆转录酶和聚合酶。7.根据权利要求3‑6任一项所述的检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒(25μL体系)包括：8.一种权利要求3‑7任一项所述检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：2CN113801961A权利要求书2/2页(1)提取RNA：以常规方法提取待测样品的RNA；(2)rRT‑RAA反应体系扩增：以提取的RNA为模板，利用权利要求3‑7任一项所述试剂盒进行rRT‑RAA扩增反应；(3)结果判定。9.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述rRT‑RAA扩增反应的条件为在42℃下恒温扩增30min。10.权利要求1或2所述检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA引物对和探针或权利要求3‑7任一项所述的检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA试剂盒在猪塞内卡病毒A检测领域的应用。3CN113801961A说明书1/8页检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA引物对和探针、试剂盒及应用技术领域[0001]本发明属于动物疫病检测技术领域，具体涉及一种可快速、灵敏地检测猪塞内卡病毒A的rRT‑RAA引物对和探针、试剂盒，并进一步公开其基于实时荧光逆转录重组酶介导的等温扩增(real‑timereversetranscriptionrecombinase‑aide