用于检测苜蓿花叶病毒的引物及探针、试剂盒和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115029481A(43)申请公布日2022.09.09(21)申请号202210424542.6C12N15/11(2006.01)(22)申请日2022.04.21C12R1/94(2006.01)(71)申请人黑龙江省农业科学院经济作物研究所地址150080黑龙江省哈尔滨市南岗区学府路368号(72)发明人高艳玲范国权白艳菊张威张抒程胜群孙旭红申宇马纪邱彩玲刘凯(74)专利代理机构哈尔滨市松花江专利商标事务所23109专利代理师李红媛(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6851(2018.01)权利要求书2页说明书11页序列表5页附图3页(54)发明名称用于检测苜蓿花叶病毒的引物及探针、试剂盒和应用(57)摘要用于检测苜蓿花叶病毒的引物及探针、试剂盒和应用，它涉及检测领域。本发明要解决目前无法获取苜蓿花叶病毒(alfalfamosaicvirus,AMV)三分体基因组(RNA1、RNA2、RNA3)在虫体内以及马铃薯上的含量，有针对性的进行检测的问题。本发明建立了AMVEvaGreen染料法RT‑qPCR和TaqMan探针法RT‑qPCR和RT‑PCR检测技术，比较三者检测灵敏度，建立标准曲线以检测包含休眠块茎在内的马铃薯6个部位组织、AMV传播介体蚜虫及危害马铃薯的重要昆虫蓟马中病毒含量。旨在为种薯产业待茎尖剥离的候选块茎、种苗和各级种薯的检测与定量提供技术支持。CN115029481ACN115029481A权利要求书1/2页1.用于检测苜蓿花叶病毒的引物、探针，其特征在于所述的引物、探针为RT‑PCR引物、EvaGreen染料法RT‑qPCR引物或TaqMan探针法RT‑qPCR引物及探针；所述的RT‑PCR引物为：1‑970F：CGAATCGAACGTAAGCAA；1‑1290R：ATGATTCGTTGAAGAAGATAA；2‑812F：ATGAAGCCGTCATATCAGGT；2‑1054R：TCAGATCGATTCGACATGGA；3‑1749F：TACCGATTCAACGAAGTTT；3‑1957R：TATCAGGAGCGAATAGGACT；所述的EvaGreen染料法RT‑qPCR引物为：1‑970F：CGAATCGAACGTAAGCAA；1‑1290R：ATGATTCGTTGAAGAAGATAA；2‑812F：ATGAAGCCGTCATATCAGGT；2‑1054R：TCAGATCGATTCGACATGGA；3‑1522F：GTCTCACTGATGACGTGACG；3‑1629R：CAAACCCGAACTTCTCATT；所述的TaqMan探针法RT‑qPCR引物及探针为：1‑970F：CGAATCGAACGTAAGCAA；1‑1102R：CCATTTGTCCTTTGACTCTATT；探针P1：5`CY5‑TTTGTCCCCAAGATGCCACAYTCC‑3`2‑812F：ATGAAGCCGTCATATCAGGT；2‑1006R：CAACCCATTCTTGAAAATACTT；探针P2：5`HEX‑TCAGGTAATGATTGGATGACGTTGG‑3`；3‑1749FF：TACCGATTCAACGAAGTTT3‑1957R：TATCAGGAGCGAATAGGACT；探针P3：5`6‑FAM‑AGCAGGGCCCCTCCGCAG‑3`。2.如权利要求1所述的用于检测苜蓿花叶病毒的引物、探针的应用，其特征在于利用所述的检测苜蓿花叶病毒的RT‑PCR引物、EvaGreen染料法RT‑qPCR引物或TaqMan探针法RT‑qPCR引物及探针检测蓟马和/或蚜虫体内的苜蓿花叶病毒。3.根据权利要求2所述的用于检测苜蓿花叶病毒的引物、探针的应用，其特征在于利用所述的检测苜蓿花叶病毒的RT‑PCR引物、EvaGreen染料法RT‑qPCR引物或TaqMan探针法RT‑qPCR引物及探针检测蚜虫体内的苜蓿花叶病毒的RNA1和RNA2。4.根据权利要求2所述的用于检测苜蓿花叶病毒的引物、探针的应用，其特征在于利用所述的检测苜蓿花叶病毒的RT‑PCR引物、EvaGreen染料法RT‑qPCR引物或TaqMan探针法RT‑qPCR引物及探针检测蓟马体内的苜蓿花叶病毒的RNA1。5.如权利要求1所述的用于检测苜蓿花叶病毒的引物、探针的应用，其特征在于利用所述的检测苜蓿花叶病毒的RT‑PCR引物、EvaGreen染料法RT‑qPCR引物或TaqMan探针法RT‑qPCR引物及探针检测马铃薯内的苜蓿花叶病毒。6.一种检测苜蓿花叶病毒的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包括PCR反应液、2CN115029481A权利要求书2/2页EvaGree