一组用于检测PEDV、TGEV和PDCoV的引物探针组、试剂盒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114807436A(43)申请公布日2022.07.29(21)申请号202210342888.1(22)申请日2022.04.02(71)申请人广东省农业科学院动物卫生研究所地址510640广东省广州市天河区五山汇景南路白石岗街21号(72)发明人吕殿红赵亮翟颀温肖会罗胜军贾春玲周秀蓉(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205专利代理师薛建强(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表3页附图6页(54)发明名称一组用于检测PEDV、TGEV和PDCoV的引物探针组、试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一组用于检测PEDV、TGEV和PDCoV的引物探针组、试剂盒及其应用，特别涉及分子检测技术领域。本发明的用于检测PEDV、TGEV和PDCoV中的至少一种的引物探针组，包括第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组；所述第一引物探针组包括针对PEDV的特异性引物对和探针；所述第二引物探针组包括针对TGEV的特异性引物对和探针；所述第三引物探针组包括针对PDCoV的特异性引物对和探针。该组引物探针组灵敏性好，特异性高，重复性好，能够同时鉴别诊断PEDV、TGEV和PDCoV，可以为猪腹泻相关疾病防控提供一定技术支持。CN114807436ACN114807436A权利要求书1/1页1.一组用于检测PEDV、TGEV和PDCoV中的至少一种的引物探针组，其特征在于，包括第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组；所述第一引物探针组为针对PEDV的特异性引物对和探针，所述特异性引物对PEDV‑F/R的序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示，探针PEDV‑P的序列如SEQIDNO.3所示；所述第二引物探针组为针对TGEV的特异性引物对和探针，所述特异性引物对TGEV‑F/R的序列如SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示，探针TGEV‑P的序列如SEQIDNO.6所示；所述第三引物探针组为针对PDCoV的特异性引物对和探针，所述特异性引物对PDCoV‑F/R的序列如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示，探针PDCoV‑P的序列如SEQIDNO.9所示。2.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述PEDV‑P、所述TGEV‑P和所述PDCoV‑P的5'端分别连接有不同的荧光基团；所述PEDV‑P、所述TGEV‑P和所述PDCoV‑P的3'端分别连接有淬灭基团。3.一种用于检测PEDV、TGEV和PDCoV中的至少一种的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物探针组。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述引物探针组中，PEDV‑F、PEDV‑R与PEDV‑P的工作浓度的摩尔比为5:4‑6:1‑3；TGEV‑F、TGEV‑R与TGEV‑P的工作浓度的摩尔比为6:5‑7:4‑6；PDCoV‑F、PDCoV‑R与PDCoV‑P的工作浓度的摩尔比为1:0.5‑1.5:0.5‑1.5；PEDV‑P、TGEV‑P与PDCoV‑P的工作浓度的摩尔比为4:4‑6:1‑3。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PEDV‑P的工作浓度为100nM。6.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性标准品和阴性标准品。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法如下：(1)提取样品的核酸；(2)采用权利要求6所述的试剂盒对所述核酸进行PCR检测，反应结束后分析结果。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述步骤(2)中，所述PCR的反应程序为：52℃5min；95℃10s；95℃5s，50℃‑56℃30s，35‑45个循环。9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述样本包括猪的肠道组织、肠道内容物和粪便中的至少一种。10.权利要求1或2所述的引物探针组在制备检测PEDV、TGEV和PDCoV中的一种或多种的试剂中的应用。2CN114807436A说明书1/9页一组用于检测PEDV、TGEV和PDCoV的引物探针组、试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及分子检测技术领域，特别涉及一组用于检测PEDV、TGEV和PDCoV的引物探针组、试剂盒及其应用。背景技术[0002]猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)、猪传染性肠胃炎病毒(Transmissiblegastroenteritisvirus，TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(Porcinedeltacoronavir