探针和引物组合物及其试剂盒和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109161544A(43)申请公布日2019.01.08(21)申请号201811090989.4(22)申请日2018.09.19(71)申请人迈克生物股份有限公司地址611731四川省成都市高新区百川路16号(72)发明人文春苗杨文秀龙腾镶(51)Int.Cl.C12N15/11(2006.01)C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6851(2018.01)C12Q1/6886(2018.01)权利要求书1页说明书10页序列表2页附图3页(54)发明名称探针和引物组合物及其试剂盒和应用(57)摘要本发明公开一种探针和引物组合物及其试剂盒和应用。本发明的探针和引物组合物、试剂盒是针对人乳头瘤病毒E6E7区，最大程度避免了因整合丢失而发生漏检的问题。CN109161544ACN109161544A权利要求书1/1页1.一种探针和引物组合物，其特征在于：该组合物包括以下组分：(1)探针组，包括与16型人乳头瘤病毒E6/E7区互补的第一探针，序列为SEQIDNO.1；与18型人乳头瘤病毒E6/E7区互补的第二探针，序列为SEQIDNO.4；与细胞内β-珠蛋白基因的DNA互补的第三探针，序列为SEQIDNO.7；(2)引物组，包括与16型人乳头瘤病毒E6/E7区互补的第一引物对，序列为SEQIDNO.2～3；与18型人乳头瘤病毒E6/E7区互补的第二引物对，序列为SEQIDNO.5～6；与细胞内β-珠蛋白基因的DNA互补的第三引物对，序列为SEQIDNO.8～9。2.根据权利要求1所述的探针和引物组合物，其特征在于：所述第一探针、第二探针和第三探针分别标记不同的荧光标记物。3.根据权利要求2所述的探针和引物组合物，其特征在于：所述荧光标记物是最大发射波长为518nm、538～555nm、574～575nm、602～615nm、640nm、660～667nm或690nm的荧光染料。4.权利要求1～3任意一项所述的探针和引物组合物在制备用于检测人乳头瘤病毒的试剂盒中的应用。5.一种人乳头瘤病毒检测的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括与16型人乳头瘤病毒E6/E7区互补的第一探针和第一引物对，其中所述第一探针具有如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，所述第一引物对具有如SEQIDNO.2～3所示的核苷酸序列；与18型人乳头瘤病毒E6/E7区互补的第二探针和第二引物对，其中所述第二探针具有如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列，所述第二引物对具有如SEQIDNO.5～6所示的核苷酸序列；以及与细胞内β-珠蛋白基因的DNA互补的第三探针和第三引物对，其中所述第三探针具有如SEQIDNO.7所示的核苷酸序列，所述第三引物对具有如SEQIDNO.8～9所示的核苷酸序列。6.根据权利要求5所述的人乳头瘤病毒检测的试剂盒，其特征在于：所述第一探针、第二探针和第三探针分别标记不同的荧光标记物。7.根据权利要求6所述的人乳头瘤病毒检测的试剂盒，其特征在于：所述荧光标记物是最大发射波长为518nm、538～555nm、574～575nm、602～615nm、640nm、660～667nm或690nm的荧光染料。8.权利要求1～3任意一项所述的探针和引物组合物在制备用于检测人乳头瘤病毒相关病症的试剂中的应用。9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述人乳头瘤病毒相关病症选自宫颈癌、外阴癌、阴道癌、肛门癌、阴茎癌和口咽癌。2CN109161544A说明书1/10页探针和引物组合物及其试剂盒和应用技术领域[0001]本发明涉及分子生物学及医学检验和体外诊断领域，具体涉及探针和引物组合物及其试剂盒和应用。背景技术[0002]宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，近年来，我国宫颈癌呈高发趋势，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌。我国每年新发病例约13.5万，占全球发病数量的1/3，占女性生殖系统恶性肿瘤发病率的73-93％，为发达国家的6倍，并趋于年轻化，年龄在35岁以下的宫颈癌患者占到三分之一，且性活跃的年轻妇女感染率最高，感染的高峰年龄在18-28岁，感染率可达40％以上。在全球范围内，每年约有20多万女性死于宫颈癌，而在全世界每年新增的宫颈癌病例中，也约有三分之一是来自中国。虽然癌早期和癌前病变阶段并没有特别的临床表现，易被忽视，但由于宫颈癌的病因明确，且发展过程中存在较长的、可逆转的癌前病变期，因而也是唯一一种可以通过医学干预降低发病率和死亡率的恶性肿瘤。如果能及时发现宫颈癌前病变，并且在癌前病变阶段进行医学干预，其治愈率可高达98％。但是，一旦发展成为癌症，则只有20％的女性患者能存活五年。因此，筛查仍是目前预防宫颈癌的关键。[0003]研究发现，人乳头瘤病毒(