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本发明公开了一种检测miRNA的CDA探针引物组、试剂盒及其应用。所述CDA探针引物组包括:探针1、探针2、引物MF、引物MR;探针1从3’到5’端分别由R1c区和T1区组成,探针2从3’到5’端分别由T2区、M区和F1区组成,引物MF由F1区和M1c区组成,引物MR由R1区和M2区组成;其中T1区与待测miRNA的部分序列互补,T2区与待测miRNA的另一部分序列互补,T1和T2两部分与完整的待测miRNA序列互补;所述M区包括M1区和M2区,M1区与M1c区互补,M2区与M2c区互补,R1区与R1c区互补,F1区与F1c区互补;所述探针1的5’端被磷酸化修饰。本发明提供的方法或试剂盒无需昂贵的仪器、也无需复杂的操作即可完成对miRNA的快速准确检测。