丹参多糖在制备减肥类药物中的用途.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114886911A(43)申请公布日2022.08.12(21)申请号202111563414.1A61K125/00(2006.01)(22)申请日2021.12.20(71)申请人青岛农业大学地址266000山东省青岛市城阳区长城路(72)发明人李秋黄小丽刘聪敏宋志强候冉冉(74)专利代理机构青岛晸投知识产权代理事务所(普通合伙)37353专利代理师董喜(51)Int.Cl.A61K31/715(2006.01)A61P3/04(2006.01)C08B37/00(2006.01)G01N21/78(2006.01)G01N21/31(2006.01)权利要求书2页说明书7页(54)发明名称丹参多糖在制备减肥类药物中的用途(57)摘要本发明提供了丹参多糖在制备减肥类药物中的用途，具体地，提供了丹参中药材，并从中提取分离纯化丹参多糖这一主要活性物质，其制备方法为采用水提醇沉法进行粗糖的提取，Sevage法除蛋白，冷冻干燥得到粗糖，DEAEPuroseFF离子交换柱层析对丹参多糖进行纯化，再进行丹参多糖含量的测定，糖含量为79.16％，该丹参多糖纯度高，活性好，实验结果表明提取的丹参多糖对喂食高脂饲料小鼠体重的增长具有抑制作用，有潜在的减肥功效，同时对免疫抑制模型小鼠的免疫系统有一定调节作用。CN114886911ACN114886911A权利要求书1/2页1.一种丹参多糖在制备减肥类药物中的用途，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，丹参粗多糖的提取和制备：将丹参清洗干净后加95％乙醇，用电磁炉煮1‑3h，将乙醇倒掉并用清水清洗，再加入10L水，保持微沸煮1‑3h，将药液过滤出来，加热浓缩至1L，然后加入四倍体积的乙醇，边加边搅拌，静置过夜；采用正丁醇：三氯甲烷＝1：4的Sevage试剂与提取液按照1:3的比例配制混合液，剧烈震荡混合均匀，每次搅拌25‑35min，静置呈现分层为止，将上层溶液留下，下层舍弃，多次分离，直至下层溶液呈透明，收集最后一次的提取液；配制丹参多糖溶液850ml，用sevage法进行蛋白质的去除，将丹参多糖溶液装至离心管中，每只25‑35ml，放入‑80℃的冰箱中冷冻1‑5min，待冻干机冷肼的温度降到‑40℃，将离心管去盖，用保鲜膜盖口并扎1‑5个个孔，迅速放入冻干机中，待管中液体变为干燥状即可停止冻干机，获得丹参多糖的粗糖，随后再对丹参多糖纯化、测量产品中粗糖含量，即可；步骤二，紫外光谱和红外光谱检测多糖的结构：称取2.5mg丹参多糖，将其溶解于5mL蒸馏水中，取适量多糖溶液测量其紫外光谱，波长为190‑400nm；红外光谱分析：取适量的KBr粉末置于红外灯下烘干，然后取少量压片，进行红外扫描，谱线作为背景峰，将1mg丹参多糖与100mg烘干的KBr粉末混合，置于玛瑙研钵中，研磨至无颗粒感，取适量置于压片器内，压制5min，待薄片通体透明或中间部分完全透明且无明显裂痕后，方可进行红外扫描；步骤三，测定丹参多糖含量，再通过改变丹参多糖的因素来判断对小鼠体重及免疫的影响。2.根据权利要求1所述的一种丹参多糖在制备减肥类药物中的用途，其特征在于，所述丹参多糖纯化的具体操作方法为：取用乙醇浸泡的DEAEPuroseFF填料，置于500ml烧杯中，静置后弃去上清液，加蒸馏水清洗2‑3次至无乙醇气味，然后加蒸馏水适量，搅拌均匀后置与超声机超声脱气后备用；装柱：将层析柱清洗干净后垂直固定于铁架台上，拧紧层析柱下端后，加1‑3cm高蒸馏水，待蒸馏水充满下端软管后，用夹子夹紧软管，防止液体流出，后用玻璃棒轻敲柱身使底部气泡浮出，用玻璃棒轻轻搅拌已脱好气的填料，使其与蒸馏水充分混匀，然后在玻璃棒引流下缓缓加入层析柱中，并请敲柱身防止填料中产生气泡，待层析柱上端产生2cm高上清液时打开下端夹子，使液体缓缓流出，并不断向柱内添加填料，直至柱内形成柱高2/3的填料床；平衡：将层析柱上端拧紧后连接恒流泵，以5‑10mL/min的速率过水平衡；上样：将填料上方液体用注射器吸出后，取0.1g/ml的丹参多糖溶液5ml，沿柱壁缓缓加入，并补充水至原始液面；洗脱：分别用蒸馏水、0.1mol/LNaCl梯度洗脱，流速1mL/min，并用自动部分收集器分部收集。3.根据权利要求1所述的一种丹参多糖在制备减肥类药物中的用途，其特征在于，所述测量产品中粗糖含量的具体操作方法为：采用硫酸‑苯酚法测粗品中多糖的含量。将自动组份收集器中第4管至第98管的组分各取40μL于96孔板中，各加5％苯酚溶液20μL，硫酸100μL，混合均匀后室温放置30分钟，在490nm处测定各管吸光度，以洗脱管号为横坐标，以490m吸光值为纵坐标绘制出洗脱曲线图，将多糖溶液收集起来进行冻干，将用蒸馏水收集的