一种甾体类化合物及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114920792A(43)申请公布日2022.08.19(21)申请号202210487874.9(51)Int.Cl.(22)申请日2022.05.06C07J9/00(2006.01)C12P33/00(2006.01)(83)生物保藏信息A01N45/00(2006.01)CGMCCNo.214692021.03.16A01P3/00(2006.01)(71)申请人中国农业科学院烟草研究所（中国C12R1/66(2006.01)烟草总公司青州烟草研究所）地址266101山东省青岛市崂山区科苑经四路11号(72)发明人张鹏申国明高丽伟任晓红姜芳陶德欣高加明王鹏丁志勇(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11465专利代理师崔自京权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种甾体类化合物及其制备方法和应用(57)摘要本发明属于植物化学技术领域，具体涉及一种甾体类化合物及其制备方法。本发明所述甾体类化合物是从烟草内生真菌Aspergillustennesseensis1022LEF当中制备获得。通过高分辨质谱和核磁共振谱，将所述新颖结构的甾体类化合物命名为tennessoidA。所述甾体类化合物tennessoidA对多种植物病原真菌具有明显的抑制活性。CN114920792ACN114920792A权利要求书1/1页1.一种甾体类化合物，其特征在于，所述甾体类化合物的结构式为：2.一种如权利要求1所述的甾体类化合物的制备方法，其特征在于，所述甾体类化合物是从烟草内生真菌Aspergillustennesseensis1022LEF当中制备获得；且制备方法具体包括如下步骤：(1)无菌条件下，挑取斜面培养5天的所述菌株1022LEF适量；挑取适量1022LEF菌丝体转接于1000mL三角烧瓶中，三角烧瓶内事先装有已灭菌的300mL液体PDB培养基；将三角烧瓶于28℃下静置发酵培养30天；(2)将发酵后的所述1022LEF菌株的发酵液采用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并3次萃取液，真空减压浓缩得到乙酸乙酯提取物；(3)将乙酸乙酯提取物加入100‑200目硅胶拌样，然后经过减压柱层析进行梯度洗脱(洗脱体系分别为乙酸乙酯：石油醚＝30：1、20：1、10：1、5：1、2：1、1：1；二氯甲烷：甲醇＝20：1、10：1、5：1、1：1)，得到极性由小到大的10个组分Fr.1～Fr.10；(4)将组分Fr.5(乙酸乙酯：石油醚＝2：1组分)经过ODS反相硅胶柱洗脱(洗脱体系为10％甲醇‑水～100％甲醇)，得到极性由大到小的10个亚组分Fr.5.1～Fr.5.10；(5)将亚组分Fr.5.4(40％甲醇‑水)经过正向硅胶柱层析(200～300目硅胶，洗脱体系为二氯甲烷：甲醇＝20：1)，然后进行制备薄层层析(展开体系二氯甲烷：甲醇＝20：1)，最后通过凝胶柱层析SephadexLH‑20(甲醇洗脱)纯化得到甾体化合物tennessoidA。3.一种如权利要求2所述方法制备的甾体类化合物在植物真菌病害防治中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，将所述甾体类化合物tennessoidA用DMSO溶解，最终配成浓度为10.0mg/L的母液；并采用生长速率法测试所述化合物对植物病原真菌的抑制活性。2CN114920792A说明书1/5页一种甾体类化合物及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于植物化学技术领域，具体涉及一种甾体类化合物及其制备方法和应用。背景技术[0002]植物真菌病是由植物病原真菌引起的病害，约占植物病害的70～80％。一种作物上可发现几种甚至几十种真菌病害，在农业生产中造成了毁灭性损失。目前对于植物真菌病害主要是通过使用化学杀菌剂来控制，如氨基苯并咪唑、邻苯二甲酰亚胺等。然而，长期使用已导致植物病原真菌对化学杀菌剂产生了耐药性。此外，化学杀菌剂的长期使用也可能导致严重的食品和环境污染。这些都严重制约了化学杀菌剂的使用。因此，寻找高效安全的植物真菌病害防治方法已经迫在眉睫。[0003]生物农药是指利用生物活体或其代谢产物对农业有害生物进行杀灭或抑制的制剂。生物农药凭借在自然环境中高活性、易降解、无公害的优势，现已成为新型农药首选之一。且新型绿色无公害生物农药的创制开发，将成为未来10～15年内我国农业领域颠覆性技术的重点方向之一。其中，微生物代谢产物结构新颖，种类丰富，活性显著，是发掘天然生物农药的宝贵资源库。本发明发现了一个新型甾体类化合物，并且首次报道了该类化合物对多种植物病原真菌的抑制活性，具有发展成为新型生物农药的潜力。发明内容[0004]有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，而提供一种新型甾体类