一种提高Bacillomycin D发酵产量的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115028686A(43)申请公布日2022.09.09(21)申请号202210687664.4(22)申请日2022.06.17(71)申请人南京农业大学地址210095江苏省南京市玄武区卫岗1号(72)发明人别小妹张平陆兆新周立邦(74)专利代理机构南京天华专利代理有限责任公司32218专利代理师吴爽徐冬涛(51)Int.Cl.C07K7/56(2006.01)C12P21/04(2006.01)C12N1/38(2006.01)C12N1/20(2006.01)C12R1/07(2006.01)C12R1/125(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图3页(54)发明名称一种提高BacillomycinD发酵产量的方法(57)摘要本发明提供了一种提高BacillomycinD发酵产量的方法，以枯草芽孢杆菌fmbJ为出发菌株，通过添加生长因子VC，来提高BacillomycinD产量。在本发明方法中，在发酵培养基中添加VC，可提高BacillomycinD合成酶基因的相对表达量，促进氨基酸前体合成途径中关键酶基因转录，促进了degQ、comA、comP、comQ、sigM和spo0A等参与次级代谢产物合成的正调控信号因子的表达量上调，同时下调了一些负调控因子如rapC和abrB，使BacillomycinD的产量提升至对照组的1.44倍；同时本发明方法成本低、操作简单方便，可以有效降低脂肽的生产成本、提高生产效率，有望用于大规模生产应用。CN115028686ACN115028686A权利要求书1/1页1.一种提高BacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，在发酵初期，向发酵培养基中转接产BacillomycinD的芽孢杆菌种子液的同时，添加生长因子VC，发酵培养即可。2.根据权利要求1所述的一种提高BacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述的VC添加量为0g/L‑0.75g/L，优选VC添加量为0.6g/L。3.根据权利要求1或2所述的一种提高BacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌。4.根据权利要求3所述的一种提高BacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）fmbJ，由南京农业大学酶工程实验室自主筛选所得，菌种保藏号为CGMCCNo.0943。5.根据权利要求4所述的一种提高BacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述方法包括如下具体步骤：（1）取枯草芽孢杆菌fmbJ进行平板培养；（2）将步骤（1）中的枯草芽孢杆菌fmbJ转接至种子培养基中，进行种子液培养，种子液培养条件为37℃，180rpm，培养至OD600达0.8‑1.0；（3）将步骤（2）中的种子液转接至发酵培养基中，同时向发酵培养基中添加生长因子VC，进行发酵培养制备抗菌脂肽BacillomycinD，发酵条件为：33℃，180rpm，72‑150h。6.根据权利要求5所述的一种提高BacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述的种子培养基为：牛肉浸膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，蒸馏水定容至1000mL，pH7.0‑7.2。7.根据权利要求5或6所述的一种提高BacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述的发酵培养基为：葡萄糖20.0g，L‑谷氨酸5.0g，酵母浸膏1.0g，KH2PO40.5g，MgSO4·7H2O0.5g，KCl0.5g，CuSO4·5H2O0.15mg，FeSO4·7H2O1.2mg，MnSO45mg，蒸馏水定容至1000mL，pH7.0。8.VC在提高抗菌脂肽BacillomycinD产量方面的应用。9.根据权利要求8所述的应用，VC的添加浓度为0g/L‑0.75g/L。2CN115028686A说明书1/6页一种提高BacillomycinD发酵产量的方法技术领域[0001]本发明属于微生物发酵领域，涉及一种提高BacillomycinD发酵产量的方法。背景技术[0002]杆菌霉素D(BacillomycinD)属于伊枯草菌素(Iturin)家族，是由枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等芽孢杆菌属微生物通过非核糖体途径合成的一类脂肽物质，由脂质和肽两部分构成，脂质部分为β‑氨基脂肪酸链(C11‑C17)，肽段氨基酸序列为L‑Asn、D‑Tyr、D‑Asn、L‑Pro、L‑Glu、D‑Ser和L‑Thr，两部分通过苏氨酰‑β‑氨基键连接。BacillomycinD对黄曲霉菌、赭曲霉菌、匍枝根酶菌等病原真菌具有很强的抑制效果，有潜力成为高效安全的食品防腐剂，应用于食