一种提高普伐他汀发酵产量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108070623A(43)申请公布日2018.05.25(21)申请号201610990905.7(22)申请日2016.11.10(71)申请人北大方正集团有限公司地址100871北京市海淀区成府路298号方正大厦申请人北大医药重庆大新药业股份有限公司北大医疗产业集团有限公司(72)发明人陈华桥张葵(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君(51)Int.Cl.C12P7/62(2006.01)C12R1/01(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种提高普伐他汀发酵产量的方法(57)摘要本发明提供了一种提高普伐他汀发酵产量的方法，以马杜拉放线菌为发酵菌株，发酵培养基中添加麸皮浸汁，美伐他汀为发酵底物，在30-32℃下培养146-159h，培养过程控制美伐他汀在发酵液中的浓度为0.8～1.0g/L，发酵培养结束后得到普伐他汀，普伐他汀含量达到18g/L以上。本发明方法能够显著提高马杜拉放线菌对美伐他汀的耐受性，美伐他汀在发酵液中的浓度可达0.8～1.0g/L，比现有技术提高约0.2g/L，同时提高马杜拉放线菌对美伐他汀的转化能力，发酵培养结束，美伐他汀转化率达到74％以上。本发明方法简单易行，成本低、能耗少，可用于工业化大规模生产普伐他汀。CN108070623ACN108070623A权利要求书1/1页1.一种提高普伐他汀发酵产量的方法，其特征在于，以美伐他汀为发酵底物，在发酵培养基中添加麸皮浸汁，通过马杜拉放线菌发酵生产普伐他汀。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基的配方为：葡萄糖56-58g/L、酵母提取物22-24g/L、大豆蛋白胨6-7g/L、K2HPO4·3H2O1-2g/L、MgSO4·7H2O0.5-1g/L、(NH4)2SO41-2g/L、麸皮浸汁2.0-10.0ml/L和消沫剂0.5-1.0g/L，以水配制。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，发酵培养基中，麸皮浸汁3.0-8.0ml/L。4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述麸皮浸汁的制备方法为：取麸皮，加入其重量10～15倍量的水，浸泡2-8h，然后加热，回流提取1h，过滤，取滤液得到麸皮浸汁。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵温度为30-34℃。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，发酵温度为30-32℃。7.如权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，自美伐他汀加入已接种马杜拉放线菌的发酵培养基开始发酵起，控制美伐他汀在发酵液中的浓度为0.6-1.0g/L，持续时间为125-145h，然后停止补加美伐他汀，继续发酵12-20h后结束发酵。8.如权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，自美伐他汀加入已接种马杜拉放线菌的发酵培养基开始发酵起，控制美伐他汀在发酵液中的浓度为0.8-1.0g/L，持续时间为130-145h，然后停止补加美伐他汀，继续发酵12-16h后结束发酵。9.麸皮浸汁在提高普伐他汀发酵产量中的应用。10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，用马杜拉放线菌发酵美伐他汀的发酵培养基的配方为：葡萄糖56-58g/L、酵母提取物22-24g/L、大豆蛋白胨6-7g/L、K2HPO4·3H2O1-2g/L、MgSO4·7H2O0.5-1g/L、(NH4)2SO41-2g/L、麸皮浸汁2.0-10.0ml/L和消沫剂0.5-1.0g/L，以水配制。2CN108070623A说明书1/5页一种提高普伐他汀发酵产量的方法技术领域[0001]本发明属于发酵工程技术领域，具体涉及一种提高普伐他汀发酵产量的方法。背景技术[0002]普伐他汀是3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂，最初用于治疗高血脂症和家族性高胆固醇，后来适应症不断扩大，可以减缓动脉粥样硬化的发展，减少冠状动脉粥样硬化病变和临床心血管事件的发生。长期服用普伐他汀，无论病人是否患有冠心病，都能减低各种原因所致的死亡率，因此，普伐他汀成为目前他汀类药物中仅有的可用于胆固醇水平较高的或者冠心病的病人进行心脏病、中风一级和二级防御的药物。也有研究显示，普伐他汀还能降低糖尿病和阿尔茨海默病的发生率；能抑制肝癌细胞的增殖；能有效地治疗溃疡性结肠炎，副作用少，半年复发率低；在治疗慢性心力衰竭、舒张性心力衰竭方面，可改善心功能，改善心室重塑。[0003]普伐他汀的生产通常由两步发酵过程获得，虽然也有报道或专利(WO99/10499、WO2007/147827、US6,274,360和EP1,266,967)描述可用一步发酵的方法生产获得普伐他汀，但由于技术复杂及生产效率等原因，普伐他汀的工业化生产仍以两步发酵为主。普伐他汀的两步发酵过程为：