一种提高他克莫司产量的发酵方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107090477A(43)申请公布日2017.08.25(21)申请号201710309551.X(22)申请日2017.05.04(71)申请人广州市微生物研究所地址510663广东省广州市萝岗区科学城尖塔山路1号申请人广州迈达康医药科技有限公司华南理工大学(72)发明人秦鹏梁淑娃谢鹏黄魁英刘广宇梁宏基劳逸俊(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102代理人陈卫(51)Int.Cl.C12P17/18(2006.01)C12R1/465(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种提高他克莫司产量的发酵方法(57)摘要本发明公开了一种提高他克莫司产量的发酵方法，在常规的他克莫司发酵过程中加入吸附树脂以及流加补充糊精，所述吸附树脂在发酵时间为48h～60h时加入，所述吸附树脂的加入体积与发酵液体积比为0.001～0.1:1；所述流加补充糊精在发酵时间为1h～60h时开始补加，所述流加补充糊精的流加速度按每小时每100ml发酵液加入0.5～3g糊精。通过这种发酵生产工艺他克莫司的发酵产量明显提高。本发明能提高他克莫司发酵产量，而且所使用的吸附树脂可进行回收，实现循环利用，进一步降低生产成本。CN107090477ACN107090477A权利要求书1/1页1.一种提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，在常规的他克莫司发酵过程中加入吸附树脂以及流加补充糊精，所述吸附树脂在发酵时间为48h～60h时加入，所述吸附树脂的加入体积与发酵液体积比为0.001～0.1:1；所述流加补充糊精在发酵时间为1h～60h时开始补加，所述流加补充糊精的流加速度按每小时每100ml发酵液加入0.5～3g糊精。2.根据权利要求1所述提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，所述吸附树脂为中等极性大孔树脂和/或非极性大孔树脂。3.根据权利要求2所述提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，所述吸附树脂包括但不限于XAD16、HP20、HZ801、HZD-3、SP850和HZ830中的任一种或多种。4.根据权利要求1所述提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，所述吸附树脂的加入体积与发酵液体积比为0.03～0.1:1。5.根据权利要求1所述提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，所述流加补充糊精在发酵时间为48h～60h时开始补加。6.根据权利要求1所述提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，所述流加补充糊精的流加速度按每小时每100ml发酵液加入1～2g糊精。7.权利要求1～6中任一项所述提高他克莫司产量的发酵方法得到的他克莫司。2CN107090477A说明书1/4页一种提高他克莫司产量的发酵方法技术领域[0001]本发明涉及他克莫司生产技术领域，具体地，涉及一种提高他克莫司产量的发酵方法。背景技术[0002]他克莫司(FK506)是一种由链霉菌产生的新型23元大环内酯聚酮类物质，具有很强的免疫抑制作用，其效力比应用较广的环孢霉素A(CyclosporinA，CsA)高近100倍，而毒副作用比环孢素A更少，还具有低死亡率、高移植存活率、依赖性小等优点。[0003]他克莫司广泛应用于特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、红斑狼疮、扁平苔癣、白癜风、Nethenton综合症和抑制宿主病等自身免疫疾病的治疗。目前临床应用于预防肝脏或肾脏移植术后的移植物排斥反应，治疗肝脏、胰腺、肾脏、心脏、肺等实体器官移植术后应用其他免疫抑制药物无法控制的移植物排斥反应。然而受制于他克莫司发酵水平较低、生产成本高等因素，很多器官移植患者在经济上无法接受，导致其推广应用受到了一定的限制。[0004]目前针对他克莫司产量低下的问题，国内外展开了一系列的研究，从实验效果来看，菌种选育无疑是一种能够有效提高他克莫司产量的方法。例如：王秀琴等采用通过复合诱变的方法对出发菌株筑波链霉菌进行处理，得到一株高产菌株，其发酵产量较出发菌株提高73.6%。郑军荣等应用化学和物理诱变剂对他克莫司产生菌进行菌种诱变，并利用莽草酸和哌可酸及其相应的结构类似物作为选择压力筛选出高产突变株，相对发酵效价提高了约2倍。Jung等通过逐渐提高培养基中他克莫司的浓度来增加菌株对产物的耐受性，最终获得的菌株产量达到972mg/L。袁晖等通过紫外诱变加抗性筛选的方法处理产他克莫司的链霉菌，得到1株高产菌，其50L罐产量达到918mg/L。[0005]但是菌种选育工作的不确定性高、工作强度大，并且选育的高产菌种始终面临着生产能力退化的问题，为他克莫司的生产埋下了不稳定的隐患。因此有必要研究开发新的方法，提高他克莫司的产量，以满足实际应用的需求。发明内容[0006]本发明的目的在于针对现有技术的上述缺陷，提供一种提