一种通过脂肪酸代谢调控提高抗菌脂肽bacillomycin D产量的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114854810A(43)申请公布日2022.08.05(21)申请号202210686685.4(22)申请日2022.06.17(71)申请人南京农业大学地址210095江苏省南京市玄武区卫岗1号(72)发明人别小妹马文杰陆兆新周立邦(74)专利代理机构南京天华专利代理有限责任公司32218专利代理师吴爽徐冬涛(51)Int.Cl.C12P21/04(2006.01)C12N1/20(2006.01)C12R1/125(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图3页(54)发明名称一种通过脂肪酸代谢调控提高抗菌脂肽bacillomycinD产量的方法(57)摘要本发明属于微生物学发酵领域，具体涉及一种利用脂肪酸代谢调控提高抗菌脂肽bacillomycinD产量的方法：以一株能够合成bacillomycinD的芽孢杆菌为出发菌株，在发酵起始时分别添加0.25~5mmol/L的丙酸钠、丙酸、丁酸等3种脂肪酸或脂肪酸盐，增加培养基中的游离脂肪酸，进而调控脂肪酸代谢途径，增加活性bacillomycinD发酵产量。本发明在基础培养基中添加丙酸钠、丙酸以及丁酸，均可使bacillomycinD产量显著提高，分别可达到对照组的1.44倍、1.4倍和1.1倍；丙酸钠的添加促进bacillomycinD合成基因的表达，从基因水平上佐证了其对bacillomycinD合成的促进作用。同时，丙酸钠可以引发部分信号因子表达上调，这些上调均可促进bacillomycinD的合成。此外，丙酸钠还可促进部分脂肪酸代谢相关酶的表达CN114854810A上调，进而促进脂肪酸的代谢。CN114854810A权利要求书1/1页1.一种通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，以能够合成bacillomycinD的芽孢杆菌为生产菌株，在添加了脂肪酸和/或脂肪酸盐的基础发酵培养基中发酵，优选的，所述脂肪酸为丙酸或丁酸，所述脂肪酸盐为丙酸钠，添加量在0.25~5mmol/L。2.根据权利要求1所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌。3.根据权利要求2所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）fmbJ，由南京农业大学酶工程实验室自主筛选所得，菌种保藏号为CGMCCNo.0943。4.根据权利要求1所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，在发酵起始前，向灭菌的发酵培养基中添加脂肪酸和/或脂肪酸盐，添加终浓度为0.25~5mmol/L。5.根据权利要求4所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述丙酸钠、丙酸的最适添加量在2.5mmol/L。6.根据权利要求4所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述丁酸的最适添加量在0.25mmol/L。7.根据权利要求1‑6任一所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌活化后接种到种子培养基，再将种子液接入发酵培养基，发酵条件为33℃，180rpm，发酵时间为72‑120h。8.根据权利要求7任一所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycinD发酵产量的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：（1）菌种活化：将枯草芽孢杆菌在LA培养基上进行划线，置于37℃恒温培养箱静置培养12‑16h，挑单菌落于LB培养基中，37℃，180rpm过夜活化；（2）种子培养：将活化后的菌液接入种子培养基，37℃，180rpm培养至OD600达到0.8‑1.0；（3）发酵培养：用滤膜将脂肪酸过滤除菌，加入灭菌的发酵培养基，调整pH至7.0±0.2，然后将种子液接种到各组发酵培养基中，33℃，180rpm发酵72‑120h；（4）产物检测：将发酵液离心，收集上清液；调整上清液pH至2.0，4℃静置过夜；离心弃上清，收集沉淀，重悬，调整重悬液pH至7.0，超声处理50min，离心取上清获得bacillomycinD粗提液；粗提液过直径0.22μm的滤膜，通过分析型高效液相色谱对粗提液中的bacillomycinD进行定量检测，即可。9.权利要求1‑8任一所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycinD发酵产量的方法在bacillomycinD生产方面的应用。2CN114854810A说明书1/8页一种通过脂肪酸代谢调控提高抗菌脂肽bacillomycinD产量的方法技术领域[0001]本