一种提高棘白菌素B发酵产量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112062814A(43)申请公布日2020.12.11(21)申请号202010799046.X(22)申请日2020.08.11(71)申请人浙江工业大学地址310014浙江省杭州市下城区潮王路18号(72)发明人牛坤柳志强吴旭萍邹树平胡忠策郑裕国(74)专利代理机构杭州天正专利事务所有限公司33201代理人黄美娟李世玉(51)Int.Cl.C07K7/56(2006.01)C12P21/04(2006.01)C07K1/14(2006.01)C12R1/66(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图4页(54)发明名称一种提高棘白菌素B发酵产量的方法(57)摘要本发明公开了一种提高棘白菌素B发酵产量的方法，所述方法为：将构巢曲霉接种至发酵培养基中，分别在发酵培养的第0‑9天向发酵培养基中添加萃取剂，25～28℃、200～250rpm发酵培养完全，获得含棘白菌素B的发酵液，发酵液分离提取，获得棘白菌素B；所述萃取剂为二甲基亚砜、吐温20、吐温80、十二烷基硫酸钠或乙二胺四乙酸中的一种；本发明采用合适的萃取剂进行萃取发酵，能将胞内棘白菌素B不断萃取到胞外，减少反馈抑制，促进棘白菌素B的生物合成，提高棘白菌素B的发酵产量。CN112062814ACN112062814A权利要求书1/1页1.一种提高棘白菌素B发酵产量的方法，其特征在于所述方法为：将构巢曲霉接种至发酵培养基中，分别在发酵培养的第0-9天向发酵培养基中添加萃取剂，25～28℃、200～250rpm发酵培养完全，获得含棘白菌素B的发酵液，发酵液分离提取，获得棘白菌素B；所述萃取剂为二甲基亚砜、吐温20、吐温80、十二烷基硫酸钠或乙二胺四乙酸中的一种；所述发酵培养基组成：油酸甲酯70g/L，花生油20g/L，甘油10g/L，蛋白胨8.6g/L，L-苏氨酸3.1g/L，L-鸟氨酸盐酸盐6.1g/L，黄豆饼粉40g/L，K2HPO4·3H2O8.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，MnSO4·H2O0.2g/L，FeSO4·7H2O0.05g/L，CaCl20.3g/L，CuSO4·5H2O0.6g/L，溶剂为水，pH6.0-6.8。2.如权利要求1所述提高棘白菌素B发酵产量的方法，其特征在于所述萃取剂添加量以发酵液体积计为1-20g/L。3.如权利要求1所述提高棘白菌素B发酵产量的方法，其特征在于所述萃取剂为吐温80，添加量以发酵液体积计为10g/L。4.如权利要求1所述提高棘白菌素B发酵产量的方法，其特征在于所述萃取剂在发酵第0天加入。5.如权利要求1所述提高棘白菌素B发酵产量的方法，其特征在于所述构巢曲霉为构巢曲霉(A.nidulans)CCTCCM2012300。6.如权利要求1所述提高棘白菌素B发酵产量的方法，其特征在于所述构巢曲霉在发酵前先进行种子扩大培养，具体为：将构巢曲霉接种至PGA斜面培养基，25℃培养10～15天，获得斜面菌体；挑取斜面菌体接种至种子培养基，25℃培养3天，获得种子液；将种子液以体积浓度10％的接种量接种至发酵培养基；PGA斜面培养基：土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然；种子培养基：黄豆饼粉25g/L，葡萄糖10g/L，甘油10g/L，溶剂为水，pH自然。2CN112062814A说明书1/6页一种提高棘白菌素B发酵产量的方法(一)技术领域[0001]本发明涉及一种提高棘白菌素B发酵产量的方法。(二)背景技术[0002]棘白菌素B是一种环脂肽类化合物，目前国内外都是通过微生物发酵法得到，其中以构巢曲霉A.nidulans发酵最为普遍。棘白菌素B是生物体内由非核糖体肽合成酶合成的胞内次级代谢产物。但是该类微生物发酵过程中会碰到一些难以克服的技术问题，如发酵液粘度过高，供养不足以及传质受阻等，这些问题都会导致菌种代谢合成产物的能力下降，因此棘白菌素B发酵仍然处于实验研究阶段，如何提高其发酵产量仍然是目前急需解决的问题。[0003]萃取发酵指的是在发酵过程中添加生物相容性较好的萃取剂进行微生物发酵，一边发酵，一边萃取产物。在微生物培养过程中，常常会面临底物溶解度小、产物易被降解或者产生反馈抑制等问题，导致产物浓度较低。萃取能够消除产物的负反馈抑制作用，有效地积累产物，提高发酵产率。萃取发酵的关键是萃取剂的选择，不同于一般萃取单元操作过程中使用的萃取剂，理想的萃取剂不仅要具备产物高选择性、低粘度、与混合液较大密度差等特点，还应具备良好的生物相容性。[0004]目前，萃取发酵已广泛应用于色素、烃类、DHA、油脂、丁醇和紫杉醇等产品的生产和提取。其萃取剂大多选择表面活性剂。表面活性剂是两亲性的，包含着一个疏水尾部和一个亲水