一种来源于干腌火腿的增咸肽及制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115028682A(43)申请公布日2022.09.09(21)申请号202210756898.XC07K1/22(2006.01)(22)申请日2022.06.30C07K1/36(2006.01)C07K1/14(2006.01)(71)申请人合肥工业大学A23L27/40(2016.01)地址230000安徽省合肥市屯溪路193号申请人云南农业大学(72)发明人徐斐然徐宝才王雪峰韦磊董馨然李思琦龙白雪韩飞周辉蔡克周(74)专利代理机构苏州翔远专利代理事务所(普通合伙)32251专利代理师王华(51)Int.Cl.C07K5/072(2006.01)C07K7/06(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图5页(54)发明名称一种来源于干腌火腿的增咸肽及制备方法(57)摘要一种来源于干腌火腿的增咸肽，氨基酸序列为：Asp‑Leu，Phe‑Met‑Ser‑Ala‑Leu‑Phe或His‑Val‑Arg‑Arg‑Lys。本发明的增咸肽分子量小，易于分离纯化，增咸效果强烈，序列简单，易于合成，可应用与食品、保健品及医药生物等领域。有望取代现有市场的代盐产品。CN115028682ACN115028682A权利要求书1/2页1.一种来源于干腌火腿的增咸肽，其特征在于：氨基酸序列为：Asp‑Leu，Phe‑Met‑Ser‑Ala‑Leu‑Phe或His‑Val‑Arg‑Arg‑Lys。2.根据权利要求1所述的来源于干腌火腿的增咸肽，其特征在于：氨基酸序列为：Asp‑Leu。3.一种来源于干腌火腿的增咸肽的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：S1、火腿源提取液的制备对火腿进行处理得到粉末，将粉末分散于盐酸缓冲溶液中，匀浆后再离心，然后对上清液进行抽滤，抽滤后得到火腿源提取液；S2、火腿源提取液的透析分离对火腿源提取液进行透析，得到的透析液，再对透析液进行浓缩，得到的浓缩液冷冻干燥后得到多肽粗品；S3、多肽粗品的分离纯化将多肽粗品溶解于纯水中，过滤后装载到SephadexG‑15凝胶过滤柱上进行纯化，得到分离纯化后的多肽，然后采用离子交换层析进行进一步纯化，按照谱峰对纯化的各个组分进行感官评价，通过感官评价和电子舌辅助感官特性分析，筛选出增咸效果最好的组分；S4、增咸肽氨基酸序列测试对S3中得到的增咸效果最好的组分采用超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱，鉴定增咸肽肽序，确定三条氨基酸序列为Asp‑Leu、Phe‑Met‑Ser‑Ala‑Leu‑Phe和His‑Val‑Arg‑Arg‑Lys。4.根据权利要求3所述的来源于干腌火腿的增咸肽的制备方法，其特征在于：S1中，盐酸缓冲液的浓度为0.01mol/L，粉末与盐酸缓冲液的比例为50g:100‑200mL；匀浆时：在15000‑18000r/min下匀浆3‑5次，每次8‑12s；离心时，‑3~‑5ºC条件下10000‑14000r/min转速下离心15‑25min；上清液用0.45μm滤膜抽滤。5.根据权利要求3所述的来源于干腌火腿的增咸肽的制备方法，其特征在于：S2中，火腿源提取液置于小于3000Da的透析袋中，‑3~‑5ºC条件下透析20‑28h，得到透析液，再于60‑70ºC旋蒸，得到浓缩液。6.根据权利要求3所述的来源于干腌火腿的增咸肽的制备方法，其特征在于：S3中，色谱参数为：样品质量浓度40mg/mL；进样量200µL；洗脱液为0.01M盐酸缓冲液，流速0.5mL/min，主紫外检测波长为214nm，次紫外检测波长为250nm。7.根据权利要求3所述的来源于干腌火腿的增咸肽的制备方法，其特征在于：S3中，采用离子交换层析进行进一步纯化，具体检测条件：样品质量浓度10mg/mL；进样量2mL；色谱柱为：DEAE阴离子柱，流动相A为20mM的Tris‑HCl缓冲液，流动相B为20mM的Tris‑HCl缓冲液+1M的NaCl；梯度洗脱：第一梯度：流动相A100%，流动相B0%，洗脱体积60mL；第二梯度：流动相A90%，流动相B10%，洗脱体积60mL；第三梯度：流动相A100%，流动相B0%，洗脱体积40mL；洗脱速度为5mL/min，主紫外检测波长为214nm，次紫外检测波长为250nm；流动相A和流动相B的pH值均为9.0。8.根据权利要求3所述的来源于干腌火腿的增咸肽的制备方法，其特征在于：超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱的色谱条件为：色谱柱为安捷伦EclipsePlus‑C18；流动相A：含0.1%三氟乙酸的超纯水；流动相B：含0.1%三氟乙酸的乙腈；线性梯度洗脱：2CN115028682A权利要求书2/2页100%流动相A、0%流动相B0~1min；10