纳米酶免疫层析试纸条、制备方法及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115267177A(43)申请公布日2022.11.01(21)申请号202210844210.3G01N33/532(2006.01)(22)申请日2022.07.18(71)申请人中国农业科学院油料作物研究所地址430062湖北省武汉市武昌区徐东二路2号(72)发明人喻理李培武姜俊梁美娟张兆威王督马飞白艺珍(74)专利代理机构湖北武汉永嘉专利代理有限公司42102专利代理师胡建平(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/53(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N33/535(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图3页(54)发明名称纳米酶免疫层析试纸条、制备方法及应用(57)摘要本发明涉及一种纳米酶免疫层析试纸条、制备方法及应用。它包括免疫层析试纸条、催化反应液，含有纳米酶标记的识别第一待检测物的单克隆抗体、纳米酶标记的识别第二检测物的单克隆抗体的反应试剂，所述的催化反应液为含有TMB和双氧水的PH为3‑5的缓冲溶液。可用于粮食产品中黄曲霉毒素B1和伏马毒素B1的同步检测，具有操作简单、快速、灵敏度高、检测范围可调控的特点。CN115267177ACN115267177A权利要求书1/2页1.纳米酶免疫层析试纸条，其特征在于：它包括免疫层析试纸条、催化反应液和含有纳米酶标记的识别第一待检测物的单克隆抗体、纳米酶标记的识别第二检测物的单克隆抗体的反应试剂，其中：所述的免疫层析试纸条包括背衬底板，背衬底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和两条检测线，所述质控线包被有羊抗鼠多克隆抗体，所述两条检测线位于质控线下方，检测线上分别包被第一待检测物‑牛血清白蛋白偶联物和第二待检测物‑牛血清白蛋白偶联物，所述的催化反应液为含有TMB和双氧水的PH为3‑5的缓冲溶液；所述催化反应液中双氧水浓度为0.1‑0.2mM；TMB浓度为0.05‑0.1mM。2.根据权利要求1所述的纳米酶免疫层析试纸条，其特征在于：所述纳米酶的粒径为100‑200nm的规则菱形十二面体颗粒，铁、碳、氮元素均一分布，且铁元素以单原子形式存在碳基底上。3.根据权利要求1所述的纳米酶免疫层析试纸条，其特征在于：所述的纳米酶是以硝酸锌和2‑甲基咪唑作为有机金属框架ZIF‑8的前驱物，血红素作为单原子铁的前驱物，经过原位高温碳化制得，高温碳化温度为800‑900℃，碳化时间为1.5‑2.5h，血红素按质量百分比计，为硝酸锌的5‑10％。4.根据权利要求1所述的纳米酶免疫层析试纸条，其特征在于：所述吸水垫长40‑45mm，样品垫长10‑15mm，检测垫长22‑28mm，检测垫上质控线与硝酸纤维素膜上沿的间距为3‑4mm，每相邻两条检测线之间的间距为1‑2mm，靠近质控线的检测线与质控线的间距为5‑7mm；检测垫上每厘米检测线所需的黄曲霉毒素B1‑牛血清白蛋白偶联物的包被量为0.12‑0.24μg，每厘米检测线所需的伏马毒素B1‑牛血清白蛋白偶联物的包被量为0.3‑0.6μg，每厘米质控线所需的羊抗鼠多克隆抗体的包被量为0.12‑0.24μg；所述的待检测物分别为黄曲霉毒素B1和伏马毒素B1，抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的IC50小于等于1.6ng/mL；抗伏马毒素B1单克隆抗体的IC50小于等于0.32ng/mL。5.权利要求1所述的纳米酶免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于:步骤如下：免疫层析试纸条的制备：(1)将吸水纸剪裁为吸水垫；(2)检测垫的制备：将第一待检测物‑牛血清白蛋白偶联物、第二待检测物‑牛血清白蛋白偶联物配制包被液，用划膜方式将其于硝酸纤维素膜上进行分别间隔包被，得到两条检测线，然后于37‑40℃条件下干燥30‑60分钟；将羊抗鼠多克隆抗体配成浓度为0.2‑0.4mg/mL的包被液，用划膜方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，然后于37‑40℃条件下干燥30‑60分钟；提供催化反应液；提供纳米酶标记的识别第一检测物的单克隆抗体、纳米酶标记的识别第二检测物的单克隆抗体。6.根据权利要求5所述的纳米酶免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述催化反应液的配制方法为：TMB溶液和双氧水溶液加入到PH为3‑5的缓冲溶液中配制得到；2CN115267177A权利要求书2/2页所述的含有纳米酶标记的识别检测物的单克隆抗体为由纳米酶溶液和识别待检测物的单克隆抗体溶液混合，室温搅拌离心得到的；所述待检测物分别为黄曲霉毒素B1和伏马毒素B1；含有纳米酶标记的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备方法：将纳米酶材料和抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体的溶液混合振摇，