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本发明属于免疫检测技术领域,公开了一种基于Janus铂纳米马达的免疫层析检测方法及应用,将1mg/mL?5mg/mL的羧基功能化的Janus铂纳米马达用1mg/mL?5mg/mLEDC和1mg/mL?5mg/mLNHS活化1?2小时,再用0.1mg?1mg的目标蛋白对其进行偶联4?6小时;偶联结束后用10%的BSA溶液对其进行封闭1?2小时;然后利用XYZ三维划膜喷金仪将其均匀喷于玻纤上,最后利用加入了1?10wt%的过氧化氢的样本溶液对目标抗原进行检测。本发明可通过凭借纳米马达在溶液中的特殊的运动状态,增加抗原抗体的结合效率,从而提高免疫层析试纸条对抗原的检测能力。