一种口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115340609A(43)申请公布日2022.11.15(21)申请号202110516349.0C12N15/70(2006.01)(22)申请日2021.05.12A61K39/135(2006.01)A61K9/14(2006.01)(71)申请人中国农业科学院兰州兽医研究所A61P31/14(2006.01)地址730046甘肃省兰州市城关区徐家坪1B82Y5/00(2011.01)号B82Y40/00(2011.01)(72)发明人郑海学茹毅郝荣增马坤C12R1/19(2006.01)伍春平刘华南张贵财李亚军卢炳州李丹刘永杰杨帆田宏张克山曹伟军刘湘涛(74)专利代理机构北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙)11504专利代理师戴治娟(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表5页附图3页(54)发明名称一种口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法(57)摘要本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法。本发明发现，在氨基酸序列改造后的Encapsulin蛋白片段的特定位置引入口蹄疫病毒抗原表位序列(包括B细胞表位和T细胞表位)能够实现目标蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达，并且能够成功自组装成蛋白笼纳米颗粒；组装的蛋白笼纳米颗粒，颗粒均一，并具有较高的耐热稳定性；所述组装的蛋白笼纳米颗粒经抗原乳化后免疫豚鼠和猪，均可刺激机体产生病毒中和性抗体，具有较好的免疫保护作用，可用于口蹄疫疫苗的制备。CN115340609ACN115340609A权利要求书1/1页1.一种口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白，其特征在于，所述口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白包括口蹄疫病毒B细胞抗原表位、口蹄疫病毒T细胞抗原表位和氨基酸序列改造后的Encapsulin蛋白片段，所述改造后的Encapsulin蛋白片段的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.如权利要求1所述的口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白，其特征在于，所述口蹄疫病毒B细胞抗原表位选自VP1蛋白抗原表位的140‑158aa；所述口蹄疫病毒T细胞抗原表位选自3A蛋白抗原表位的21‑35aa。3.如权利要求2所述的口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白，其特征在于，所述口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白包括1个口蹄疫病毒B细胞抗原表位、1个口蹄疫病毒T细胞抗原表位，所述T细胞抗原表位位于所述Encapsulin蛋白片段的138～139位之间；所述B细胞抗原表位位于所述Encapsulin蛋白片段的羧基末端。4.如权利要求3所述的口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白，其特征在于，所述口蹄疫病毒B细胞抗原表位的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，所述口蹄疫病毒T细胞抗原表位的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。5.如权利要求4所述的口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白，其特征在于，所述口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示。6.一种编码权利要求5所述口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示。7.如权利要求1‑5任一所述的口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白在制备口蹄疫亚单位疫苗中的应用。8.如权利要求1‑5任一所述的口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白自组装形成的蛋白笼纳米颗粒。9.如权利要求8所述的蛋白笼纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将编码口蹄疫病毒B细胞抗原表位、口蹄疫病毒T细胞抗原表位和氨基酸序列突变的Encapsulin蛋白片段的基因序列串联，合成编码口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白的基因片段；(2)将编码口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白的基因片段连接至原核表达载体，构建重组表达质粒；(3)将所述重组表达质粒转化大肠杆菌，经过诱导表达和纯化获得口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白；(4)所述口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白自组装形成蛋白笼纳米颗粒。10.一种用于预防口蹄疫病毒感染的亚单位疫苗，其特征在于，所述亚单位疫苗包括权利要求1‑5任一所述的口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白或权利要求8所述的蛋白笼纳米颗粒。2CN115340609A说明书1/8页一种口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法。背景技术[0002]口蹄疫病毒(FootandMouthDiseaseVirus，FMDV)属于小RNA病毒科，口蹄疫病毒属，病毒粒子无囊膜，呈二十面体对称，由结构蛋白VP0、VP3和VP1组成，其中VP0蛋白由VP4和VP2组成。该病毒主要