一种蛋白抗原的纯化方法、制备的蛋白抗原及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111763238A(43)申请公布日2020.10.13(21)申请号201910261720.6A61P31/20(2006.01)(22)申请日2019.04.02A61P31/14(2006.01)(71)申请人普莱柯生物工程股份有限公司地址471000河南省洛阳市高新区凌波路5号(72)发明人田克恭胡欢鑫陈珍珍张许科(74)专利代理机构北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙)11017代理人韩登营(51)Int.Cl.C07K1/14(2006.01)C07K14/01(2006.01)C07K14/09(2006.01)A61K39/12(2006.01)A61K39/135(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表3页(54)发明名称一种蛋白抗原的纯化方法、制备的蛋白抗原及其应用(57)摘要本发明提供了一种蛋白抗原的纯化方法，其中，该纯化方法中速离心去除表达的蛋白液中的大分子杂质，用核酸酶处理该去除大分子杂质后的蛋白液，以去除宿主菌的核酸，加入EDTA抑制核酸酶；以及用凝胶层析对该抑制了核酸酶的蛋白液进行纯化分离，以获得纯化的蛋白抗原。本发明的纯化方法能相当程度地保留免疫原性，且显著增加纯化蛋白的收率。本发明还提供了该纯化方法制备的蛋白抗原，以及用其制备的疫苗。CN111763238ACN111763238A权利要求书1/1页1.一种蛋白抗原的纯化方法，其中，所述纯化方法包括以下步骤：步骤(1)中速离心去除表达的蛋白液中的大分子杂质；步骤(2)用核酸酶处理所述步骤(1)获得的所述去除了大分子杂质后的蛋白液，以降解宿主菌的核酸；步骤(3)将所述步骤(2)核酸酶处理后的病毒液加入EDTA抑制核酸酶；以及步骤(4)用凝胶层析对所述步骤(3)的所述抑制了核酸酶的蛋白液进行纯化分离，以获得纯化的蛋白抗原。2.根据权利要求1所述的蛋白抗原的纯化方法，其中，所述步骤(1)中所述表达的蛋白液经浓缩前置处理。3.根据权利要求1所述的蛋白抗原的纯化方法，其中，所述步骤(1)中的所述中速离心速率为8000rpm，所述离心时间为25min。4.根据权利要求1所述的蛋白抗原的纯化方法，其中，所述步骤(2)中所述核酸酶为Benzonase核酸酶，所述核酸酶添加量为1.5～2U/mL，所述核酸酶处理时间为30min。5.根据权利要求1所述的蛋白抗原的纯化方法，其中，所述步骤(2)中所述核酸酶添加量为1.8U/mL。6.根据权利要求1所述的蛋白抗原的纯化方法，其中，所述步骤(3)中EDTA浓度为2mmol/L。7.根据权利要求1所述的蛋白抗原的纯化方法，其中，所述步骤(1)中所述蛋白抗原为猪圆环病毒蛋白、猪伪狂犬病病毒蛋白、猪细小病毒蛋白、或口蹄疫病毒蛋白。8.根据本发明权利要求1～7所述蛋白抗原的纯化方法制备的蛋白抗原。9.根据权利要求8所述的蛋白抗原，其中，所述蛋白抗原为猪圆环病毒Cap蛋白，或O型口蹄疫病毒样粒子。10.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的权利要求8或9所述的蛋白抗原和药学上可接受的载体；优选地，所述蛋白抗原为猪圆环病毒Cap蛋白，或O型口蹄疫病毒样粒子；更优选地，所述猪圆环病毒Cap蛋白为SEQIDNo.1所示核苷酸序列或其简并序列编码，所述O型口蹄疫病毒样粒子由O型口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3、VP4蛋白组装的O型口蹄疫病毒样粒子，O型口蹄疫病毒VP1蛋白为SEQIDNo.2所示核苷酸序列或其简并序列编码，VP2蛋白为SEQIDNo.3所示核苷酸序列或其简并序列编码，VP3蛋白为SEQIDNo.4所示核苷酸序列或其简并序列编码，VP4蛋白为SEQIDNo.5所示核苷酸序列或其简并序列编码；进一步优选地，所述猪圆环病毒Cap蛋白含量为20μg/ml～100μg/ml，所述药学上可接受的载体为水溶性佐剂；所述O型口蹄疫病毒样粒子含量为160μg/ml～240μg/ml，所述药学上可接受的载体为206佐剂；更一步优选地，所述猪圆环病毒Cap蛋白含量为50μg/ml，所述药学上可接受的载体为水溶性佐剂；所述O型口蹄疫病毒样粒子含量为200μg/ml，所述药学上可接受的载体为206佐剂。2CN111763238A说明书1/10页一种蛋白抗原的纯化方法、制备的蛋白抗原及其应用技术领域[0001]本发明涉及含抗原的医药配制品领域，特别涉及蛋白抗原的纯化方法、及其制备的蛋白抗原和疫苗组合物。背景技术[0002]蛋白抗原的纯化是研究及生产中的一个关键步骤。为了去除表达过程中的杂质，一个好的蛋白抗原纯化工艺应该能有效去除各种表达过程中带来的杂蛋白、核酸及其他杂质，并且具有很好的抗原回收率；同时最大限度保留其抗原表位功能。[0003]传统