ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白及其试剂盒与应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116023506A(43)申请公布日2023.04.28(21)申请号202211058972.7C12N1/21(2006.01)(22)申请日2022.08.31G01N33/569(2006.01)G01N33/543(2006.01)(71)申请人广东省农业科学院动物卫生研究所G01N33/58(2006.01)地址510640广东省广州市天河区五山白C07K16/08(2006.01)石岗街C12R1/19(2006.01)(72)发明人宋帅李春玲孙铭飞勾红潮蒋智勇李艳张昆丽杨冬霞卞志标(74)专利代理机构北京智行阳光知识产权代理事务所(普通合伙)11738专利代理师周鑫(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/70(2006.01)权利要求书1页说明书13页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白及其试剂盒与应用(57)摘要本发明提供了一种ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白及其试剂盒与应用，属于基因工程技术领域。所述ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。该融合蛋白与非洲猪瘟病毒阳性血清具有良好的免疫反应原性。利用获得的ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白作为包被抗原，建立了检测非洲猪瘟病毒非结构蛋白抗体的ELISA检测方法；该检测试剂盒具有特异性强、敏感性高、重复性好和准确性高的特点，可以有效地检测非洲猪瘟病毒感染后产生的抗体情况，为非洲猪瘟的诊断、感染机制的研究、安全高效疫苗的研制提供重要帮助。CN116023506ACN116023506A权利要求书1/1页1.一种非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。2.编码权利要求1所述非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白的核苷酸。3.根据权利要求2所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。4.含有权利要求2或3所述核苷酸的表达载体。5.含有权利要求2或3所述核苷酸或权利要求4所述表达载体的宿主菌。6.一种非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括酶标板，所述酶标板包被有权利要求1所述非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白。7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括包被液、洗涤液和封闭液。8.一种非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：构建权利要求4所述的表达载体，然后将表达载体转化至宿主菌，对含有非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白的宿主细胞诱导表达后，进行超声破碎、包涵体溶解和纯化，收集得到非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白。9.一种抗非洲猪瘟病毒非结构蛋白抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的优势抗原表位融合蛋白作为抗原免疫动物，在动物体内产生非洲猪瘟病毒非结构蛋白抗体。10.权利要求1所述融合蛋白、权利要求2所述核苷酸、权利要求4所述表达载体或权利要求5所述宿主菌在制备检测非洲猪瘟病毒产品中的应用。2CN116023506A说明书1/13页ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白及其试剂盒与应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白及其试剂盒与应用。背景技术[0002]非洲猪瘟(AfricanSwinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(AfricanSwinefevervirus，ASFV)引起猪的一种高度接触性传染病，其临床症状和病理变化与经典猪瘟非常相似，有着较高的发病率和死亡率。ASFV是线状双股DNA病毒，成熟病毒粒子呈20面体对称且具有囊膜，基因组的大小在不同毒株之间存在一定的差异性，总体介于170～190kb之间，基因组含有150多个开放阅读框，约编码100多种非结构蛋白和68种结构蛋白。非结构蛋白在病毒的复制与组装、调节宿主细胞机能、逃逸宿主天然免疫等方面发挥了重要作用。但有关ASFV非结构蛋白抗体检测方法相当较少，临床应用中大多都是针对非洲猪瘟病毒结构蛋白抗体的检测，严重制约了对非洲猪瘟病毒相关致病机制的深入研究和了解。[0003]A238L蛋白是非洲猪瘟病毒重要的非结构蛋白，在病毒的感染过程中可调节宿主细胞的相关生物学功能，为非洲猪瘟病毒创造良好的生存空间。由于该蛋白含有1kb锚蛋白重复序列，因此被认为是1kb的类似物。在不同感染细胞中，该蛋白由于受不同细胞内环境的影响，使该蛋白分子量略有差异。Sil