一种重组3型鸭腺病毒、制备方法及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114561367A(43)申请公布日2022.05.31(21)申请号202210179819.3A61K39/235(2006.01)(22)申请日2022.02.25A61K39/125(2006.01)A61P31/14(2006.01)(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人谢青梅符军何家辉刘仙琦封柯宇邵冠明(74)专利代理机构西安正华恒远知识产权代理事务所(普通合伙)61271专利代理师陈选中(51)Int.Cl.C12N7/01(2006.01)C12N15/41(2006.01)C12N15/35(2006.01)C12N15/85(2006.01)权利要求书1页说明书15页附图6页(54)发明名称一种重组3型鸭腺病毒、制备方法及其应用(57)摘要本发明提出了一种重组3型鸭腺病毒、制备方法及其应用，涉及分子生物学技术领域。该重组3型鸭腺病毒分别能表达鸭病毒性肝炎病毒VP1基因和番鸭细小病毒VP3基因，VP1基因的序列如SEQIDNO.1所示，VP3基因的序列如SEQIDNO.2所示，其能够主要解决现目前3型鸭腺病毒疫苗的应用范围较窄的技术问题，另外，本发明还提供了一种重组3型鸭腺病毒的制备方法，该方法不仅操作简单，且耗时短、精确性高。CN114561367ACN114561367A权利要求书1/1页1.一种重组3型鸭腺病毒，其特征在于，包括目的基因和3型鸭腺病毒毒株，所述目的基因包括鸭病毒性肝炎VP1基因，所述VP1基因的序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的重组3型鸭腺病毒，其特征在于，所述目的基因还包括番鸭细小病毒VP3基因，所述VP3基因的序列如SEQIDNO.2所示。3.一种如权利要求1或2所述的重组3型鸭腺病毒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取所述3型鸭腺病毒毒株与受体载体连接，得到感染性克隆质粒，然后通过Red/ET重组技术，在所述感染性克隆质粒的插入位点引入筛选基因，再使用插入的所述目的基因替换筛选基因，得到含有所述目的基因和所述3型鸭腺病毒毒株的重组质粒，进而拯救获得重组3型鸭腺病毒。4.根据权利要求3所述的重组3型鸭腺病毒的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：以质粒pBR322‑Cm‑ccdB为模板，扩增含有同源臂的CMV‑Cm‑ccdB‑SV40pA双向筛选基因表达盒；将所述感染性克隆质粒与所述双向筛选基因表达盒共同转入第一感受态菌体细胞内，得到第一重组质粒，将所述目的基因的扩增产物与所述第一重组质粒共同转入第二感受态菌体细胞内，得到第二重组质粒；将所述第二重组质粒酶切去除所述受体载体后回收并转染DEF细胞，得到悬液，将所述悬液冻融、离心后取上清液，即得到所述重组3型鸭腺病毒。5.根据权利要求3所述的重组3型鸭腺病毒的制备方法，其特征在于，所述受体载体为p15A，所述3型鸭腺病毒毒株为CH‑GD‑12‑2014。6.根据权利要求5所述的重组3型鸭腺病毒的制备方法，其特征在于，所述双向筛选基因表达盒的插入位点为所述3型鸭腺病毒毒株CH‑GD‑12‑2014的ORF2尾和ORF14尾之间的基因间隔区。7.根据权利要求4所述的重组3型鸭腺病毒的制备方法，其特征在于，所述第一感受态菌体细胞能表达Redα/β重组酶，所述第二感受态菌体细胞能表达RecE/T重组酶。8.根据权利要求7所述的重组3型鸭腺病毒的制备方法，其特征在于，所述第一感受态菌体细胞为GBredgyrA462E.coli菌体细胞，所述第一重组质粒为p15A‑DAdV3‑CMV‑Cm‑ccdB‑SV40pA；所述第二感受态菌体细胞为GBdirE.coli菌体细胞，所述第二重组质粒为p15A‑DAdV3‑CMV‑DHAV‑VP1‑SV40pA或p15A‑DAdV3‑CMV‑MDPV‑VP3‑SV40pA。9.根据权利要求8所述的重组3型鸭腺病毒的制备方法，其特征在于，所述第一重组质粒在转入所述第二感受态菌体细胞前还包括前处理，所述前处理包括如下步骤，将所述第一重组质粒p15A‑DAdV3‑CMV‑Cm‑ccdB‑SV40pA的Cm‑ccdB区段切除。10.一种如权利要求1或2所述的重组3型鸭腺病毒在制备3型鸭腺病毒疫苗中的应用。2CN114561367A说明书1/15页一种重组3型鸭腺病毒、制备方法及其应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及一种重组3型鸭腺病毒、制备方法及其应用。背景技术[0002]疫苗接种是控制人类与动物传染病的一种极为有效的手段。传统的灭活疫苗和弱毒疫苗具有诸多局限性，已经难以满足当前相关产业发展的要求。随着DNA重组技术的出现和快速发展，基因工程疫苗在动物传