一种长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115612643A(43)申请公布日2023.01.17(21)申请号202211190276.1(22)申请日2022.09.28(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人林俊芳张凤郭丽琼邹苑侯心悦(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245专利代理师张珍(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12R1/01(2006.01)权利要求书2页说明书10页附图1页(54)发明名称一种长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法(57)摘要本发明公开了一种长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法。该方法在改变了长双歧杆菌传统厌氧发酵方式的同时，解决了长双歧杆菌在有氧发酵时活菌数低的问题。通过本发明长双歧杆菌菌株在有氧条件下进行发酵，可达到1010‑1011CFU/mL，活菌数比国家标准至少高一万倍，可大幅度减少工业化发酵成本，简化生产流程。CN115612643ACN115612643A权利要求书1/2页1.一种长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法，其特征在于：将长双歧杆菌活化后连续传代，取最后一次传代的菌液依次在液深15～20cm、10～15cm、6～12cm的培养基中进行如下发酵培养：(1)接种到A培养基中，密封完全状态下，35～37℃发酵培养12～24h；(2)接种到A培养基中，半密封状态下，35～37℃发酵培养12～24h；(3)接种到B培养基中，35～37℃有氧发酵培养12～24h；上述操作视为一轮有氧发酵，如此重复5～10轮；其中，所述的A培养基为含有2.0～10.0g/L麦角硫因提取液、0.2～1.0g/L维生素C和0.05～0.5g/LL‑半胱氨酸盐酸盐的MRS培养基；所述的B培养基为含有2.0～10.0g/L麦角硫因提取液和0.2～1.0g/L维生素C的MRS培养基。2.根据权利要求1所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法，其特征在于：所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法是将长双歧杆菌活化后连续传代5～10代，取最后一次传代的菌液依次在液深16cm、13cm、10cm的培养基中进行所述发酵培养。3.根据权利要求1或2所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法，其特征在于：所述的密封完全状态是指：接种到装有A培养基的螺口试管中，拧紧盖子，并封加一层灭菌液体石蜡；所述的半密封状态是指：接种到装有A培养基的螺口试管中，拧松盖子，不封加一层灭菌液体石蜡。4.根据权利要求1或2所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法，其特征在于：所述的A培养基为含有2.0～7.0g/L麦角硫因提取液、0.2～0.8g/L维生素C和0.05～0.5g/LL‑半胱氨酸盐酸盐的MRS培养基；所述的B培养基为含有2.0～7.0g/L麦角硫因提取液和0.2～0.8g/L维生素C的MRS培养基。5.根据权利要求1或2所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法，其特征在于：所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法包括如下步骤：步骤1：取最后一次传代的菌液按照5％的接种量接种到装有液深16cmA培养基的螺口试管中，拧紧盖子，并封加一层灭菌液体石蜡，密封完全状态下37℃发酵培养18h；步骤2：按5％的接种量接种到装有液深16cmA培养基的螺口试管中，拧松盖子，不封加液体石蜡，半密封状态下35℃发酵培养18h；步骤3：按5％的接种量接种到装有液深16cmB培养基的螺口试管中，37℃有氧发酵18h；步骤4：按5％的接种量接种到装有液深13cmA培养基的螺口试管中，拧紧盖子，并封加一层灭菌液体石蜡，密封完全状态下37℃发酵培养18h；步骤5：按5％的接种量接种到装有液深13cmA培养基的螺口试管中，拧松盖子，不封加液体石蜡，半密封状态下35℃发酵培养18h；步骤6：按5％的接种量接种到装有液深13cmB培养基的螺口试管中，35℃有氧发酵18h；步骤7：按5％的接种量接种到装有液深10cmA培养基的螺口试管中，拧紧盖子，并封加一层灭菌液体石蜡，密封完全状态下37℃发酵培养18h；2CN115612643A权利要求书2/2页步骤8：按5％的接种量接种到装有液深10cmA培养基的螺口试管中，拧松盖子，不封加液体石蜡，半密封状态下35℃发酵培养18h；步骤9；按5％的接种量接种到装有液深10cmB培养基的螺口试管中，35℃有氧发酵18h。6.根据权利要求1或2所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法，其特征在于：所述的长双歧杆菌活化的操作为：取长双歧杆菌菌液在MRSC固体培养基平板上划线分离，厌氧培养24～48h，待平板上长出单菌落，将单菌落接种在MRSC液体培养基中厌氧培养24～48h；取菌液按2～10％的接种量进行传代，厌氧条件下，反复传代5～10代，得到活