非洲猪瘟病毒检测用重组抗原蛋白及其制备方法、检测试剂盒和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115806595A(43)申请公布日2023.03.17(21)申请号202211579308.7G01N33/58(2006.01)(22)申请日2022.12.08(71)申请人江苏农牧科技职业学院地址225300江苏省泰州市海陵区凤凰东路8号(72)发明人曹世诺朱善元周末卢会鹏吴植(74)专利代理机构北京思创大成知识产权代理有限公司11614专利代理师高爽(51)Int.Cl.C07K14/01(2006.01)C12N15/34(2006.01)C12N15/70(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称非洲猪瘟病毒检测用重组抗原蛋白及其制备方法、检测试剂盒和应用(57)摘要本发明公开了一种非洲猪瘟病毒检测用重组抗原蛋白及其制备方法、检测试剂盒和应用。所述重组抗原蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo:1所示。所述制备方法包括：将如SEQIDNo:2所示的编码基因克隆入原核表达载体后，转化感受态细胞，诱导表达转化后的所述感受态细胞，获得所述重组抗原蛋白；其中，所述原核表达载体为pET28a(+)载体，所述感受态细胞为大肠杆菌。所述试剂盒包括ELISA反应液和抗体检测板，且所述抗体检测板上包被有上述所述的重组抗原蛋白。通过上述技术方案，达到了表达量高，特异性强，亲和力高，检测成本低，能够特异性地快速实现对非洲猪瘟病毒病毒的检测的效果。CN115806595ACN115806595A权利要求书1/1页1.一种非洲猪瘟病毒检测用重组抗原蛋白，其特征在于，所述重组抗原蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo:1所示。2.根据权利要求1所述的重组抗原蛋白，其特征在于，所述重组抗原蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo:2所示。3.一种如权利要求1或2所述的重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将如SEQIDNo:2所示的编码基因克隆入原核表达载体后，转化感受态细胞，诱导表达转化后的所述感受态细胞，获得所述重组抗原蛋白；其中，所述原核表达载体为pET28a(+)载体，所述感受态细胞为大肠杆菌。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，诱导表达过程的诱导物为浓度为0.8‑1.2mmol/L的IPTG水溶液将如SEQIDNo:2所示的编码基因克隆入原核表达载体后，转化感受态细胞，诱导表达转化后的所述感受态细胞，获得所述重组抗原蛋白；其中，所述原核表达载体为pET28a(+)载体，所述感受态细胞为大肠杆菌。；诱导表达过程的条件为：温度为36.5‑37.5℃，时间为4‑8h。5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括对获得的所述重组抗原蛋白进行纯化；其中，所述纯化为采用Ni亲和层析柱进行纯化。6.一种非洲猪瘟病毒检测用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括ELISA反应液和抗体检测板，且所述抗体检测板上包被有根据权利要求1或2所述的重组抗原蛋白。7.根据权利要求6所述的检测用试剂盒，其特征在于，包被的所述重组抗原蛋白由重组抗原蛋白包涵体提供；且，所述重组抗原蛋白包涵体包括所述重组抗原蛋白和包涵体抗原稀释液；其中，所述包涵体抗原稀释液包括二硫苏糖醇、TritonX‑100和CBS缓冲液，且，相对于100mL的CBS缓冲液，二硫苏糖醇的含量为0.8‑1.2g，TritonX‑100的含量为0.3‑0.6mL。8.根据权利要求6所述的检测用试剂盒，其特征在于，所述ELISA反应液至少包括PBST缓冲液、封闭液、酶标二抗、显色液和终止液；优选地，所述封闭液包括脱脂奶粉和PBS缓冲液，且相对于100mL份的PBS缓冲液，脱脂奶粉的含量为2‑4g；所述酶标二抗为HRP标记的羊抗猪IgG稀释液。9.一种根据权利要求6‑8所述的检测用试剂盒在检测非洲猪瘟病毒中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用具体包括：S100、采用包涵体抗原稀释液和缓冲液混合后稀释并冻存所述重组抗原蛋白，得到冻存重组抗原蛋白，采用包被液稀释所述冻存重组抗原蛋白后包被过夜；S200、将包被后的所述冻存重组抗原蛋白经封闭后，将ELISA反应液和待测样品加入混合显色后，读取在450nm波长处的吸光度值；S300、根据获取的吸光度值进行结果的判定；优选地，当待测样品D450≥0.353时，则待测样品为非洲猪瘟病毒阳性。2CN115806595A说明书1/6页非洲猪瘟病毒检测用重组抗原蛋白及其制备方法、检测试剂盒和应用技术领域[0001]本发明涉及病毒检测领域，具体地，涉及非洲猪瘟病毒检测用重组抗原蛋白及其制备方法、检测试剂盒和应用。背景技术[0002]非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(Afr