基于纳米抗体检测三氯生残留的ELISA试剂盒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115825424A(43)申请公布日2023.03.21(21)申请号202211021877.X(22)申请日2022.08.24(71)申请人中国农业大学地址100193北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人许艇徐波杰张翔宇薛衔乐(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师黄爽(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/535(2006.01)G01N21/78(2006.01)权利要求书2页说明书9页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称基于纳米抗体检测三氯生残留的ELISA试剂盒及其应用(57)摘要本发明提供一种基于纳米抗体检测三氯生残留的ELISA试剂盒及其应用。所述试剂盒包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及设在盒体内的试剂；其中，酶标板的各孔包被有三氯生人工抗原，所述试剂包括SEQIDNO:1所示的纳米抗体，以及三氯生标准溶液、酶标二抗、PBS缓冲液、PBST洗涤液、显色液和反应终止液等。利用本发明手机号能准确灵敏地检测水、土壤、蔬菜等环境中三氯生残留，样品的前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量的样品，样品检测成本远低于传统的仪器检测方法。CN115825424ACN115825424A权利要求书1/2页1.抗三氯生纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包含如下的氨基酸序列或由其组成：i)SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；或ii)在i)的N端和/或C端连接标签得到的氨基酸序列；或iii)i)或ii)的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸得到的具有相同功能的抗体。2.编码权利要求1所述纳米抗体的核酸分子。3.含有权利要求2所述核酸分子的生物材料，所述生物材料为重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体或工程菌。4.三氯生检测试剂或试剂盒，其特征在于，有效成分为权利要求1所述的纳米抗体。5.基于纳米抗体检测三氯生残留的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及设在盒体内的试剂；所述酶标板的各孔包被有三氯生人工抗原，所述试剂包括权利要求1所述的纳米抗体，以及三氯生标准溶液、酶标二抗、PBS缓冲液、PBST洗涤液、显色液和反应终止液中的至少一种。6.根据权利要求5所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述三氯生人工抗原是由式I)所示的三氯生半抗原与载体蛋白偶联后得到的；其中，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白中的至少一种，优选牛血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白。7.根据权利要求6所述的ELISA试剂盒，其特征在于，用于包被酶标板的抗原包被液的制备方法包括：(1)将7.5mg式I)所示的三氯生半抗原、2.65mgN‑羟基琥珀酰亚胺和4.8mgN,N'‑二环己基碳二亚胺，溶于200μL无水二甲基甲酰胺中，室温下搅拌过夜反应；将反应液离心，弃沉淀，收集上清液；(2)将牛血清白蛋白20mg溶于0.05M，pH9.6的碳酸盐缓冲液2mL中，搅拌下逐滴加入所述上清液，加完后室温下继续搅拌反应4h；(3)反应结束后，将反应液装入透析袋内用PBS液透析；每6h换液一次，共换液5‑6次；透析后离心，弃沉淀，收上清液，作为抗原包被液；优选地，所述酶标板为96孔酶标板，包被抗原的包被浓度为50‑70ng/mL。8.根据权利要求5‑7任一项所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述纳米抗体的浓度为90‑110ng/mL；和/或所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的抗HA标签抗体，浓度为0.1μg/mL；和/或所述显色液包括A液和B液，A液由过氧化脲1g、柠檬酸10.3g、Na2HPO4·12H2O35.8g、吐温‑20100μL和蒸馏水1000mL配制而成，pH值5；B液由四甲基联苯胺700mg、DMSO40mL、柠檬酸10.3g和蒸馏水1000mL配制而成，pH值2.4；和/或所述反应终止液为2M的硫酸溶液。9.权利要求1所述纳米抗体的以下任一应用：2CN115825424A权利要求书2/2页1)用于三氯生检测；2)用于制备三氯生检测试剂或试剂盒；3)用于三氯生的富集和纯化；4)用于制备三氯生的富集和纯化试剂。10.权利要求4所述检测试剂或试剂盒或权利要求5‑8任一项所述ELISA试剂盒在检测样品中三氯生残留中的应用。3CN115825424A说明书1/9页基于纳米抗体检测三氯生残留的ELISA试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程、噬菌体展示技术以及ELISA检测技术领域，具体地说，涉及一种基于纳米抗体检测三氯生残留的ELISA试剂盒及其应用。背景技术[0002]三氯生(Triclosan