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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115852043A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202210872029.3(22)申请日2022.07.19(71)申请人安徽农业大学地址230036安徽省合肥市蜀山区长江西路130号(72)发明人王勇邹俊伟余菊穆苑苑刘璇李淑艳(74)专利代理机构北京东方盛凡知识产权代理有限公司11562专利代理师张国麒(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/686(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书1页说明书11页序列表(电子公布)附图2页(54)发明名称一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR引物探针组、试剂盒及应用(57)摘要本发明公开了一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR引物探针组、试剂盒及应用,属于生物信息检测技术领域。该引物探针组包括检测猫星状病毒的如SEQIDNO:1‑3所示的引物探针组;检测猫博卡病毒1型的如SEQIDNO:4‑6所示的引物探针组;检测猫库布病毒的如SEQIDNO:7‑9所示的引物探针组;检测猫细小病毒的如SEQIDNO:10‑12所示的引物探针组。本发明能同时检测并鉴别猫细小病毒、猫博卡病毒1型、猫库布病毒和猫星状病毒,具有良好的灵敏性、特异性和重复性。并且首次提供了猫库布病毒的荧光定量PCR检测方法,填补了该病毒检测缺口,完善了针对猫腹泻病毒临床诊断的医疗体系。CN115852043ACN115852043A权利要求书1/1页1.一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR引物探针组,其特征在于,包括:检测猫星状病毒的如SEQIDNO:1‑2所示的引物组和如SEQIDNO:3所示的探针;检测猫博卡病毒1型的如SEQIDNO:4‑5所示的引物组和如SEQIDNO:6所示的探针;检测猫库布病毒的如SEQIDNO:7‑8所示的引物组和如SEQIDNO:9所示的探针;检测猫细小病毒的如SEQIDNO:10‑11所示的引物组和如SEQIDNO:12所示的探针。2.根据权利要求1所述的多重荧光PCR引物探针组,其特征在于,所述探针5’端连接有荧光基团,3’端连接有猝灭基团,且,任一所述探针的所述荧光基团与其他三者荧光基团不同。3.一种权利要求1所述的多重荧光PCR引物探针组在制备检测四种猫腹泻相关病毒产品中的应用。4.一种检测猫腹泻相关病毒的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1‑2任一项所述的多重荧光PCR引物探针组。5.一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)以待测样本的DNA或cDNA为模板,使用权利要求2所述的多重荧光PCR引物探针组或权利要求4所述的试剂盒进行PCR扩增;(2)根据有无扩增曲线和Ct值,判断待测样本是否为四种猫腹泻相关病毒。6.根据权利要求5所述的多重荧光PCR方法,其特征在于,若有扩增曲线,且满足Ct≤35,说明待测样本为所述多重荧光PCR引物探针组的荧光基团对应的猫腹泻相关病毒;若无扩增曲线,说明待测样本不是四种病毒中的任何一种。7.根据权利要求5所述的多重荧光PCR方法,其特征在于,所述PCR扩增的扩增体系包括以下组分:2XTaqManFastqPCRMasterMix10μL,上下游引物各0.4μL,探针各0.2μL,模板DNA1μL,ddH2O补足至20μL。8.根据权利要求5所述的多重荧光PCR方法,其特征在于,所述PCR扩增的扩增程序为:94℃预变性3min;94℃变性5s,60℃检测信号30s,循环40次。9.一种如权利要求1‑2任一项所述的多重荧光PCR引物探针组或权利要求4所述的试剂盒在检测猫腹泻相关病毒中的应用。2CN115852043A说明书1/11页一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR引物探针组、试剂盒及应用技术领域[0001]本发明涉及生物信息检测技术领域,特别是涉及一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR引物探针组、试剂盒及应用。背景技术[0002]病毒性腹泻是猫常见的疾病,根据相关报道,大部分腹泻猫存在肠道病毒合并感染的情况。猫细小被认为是导致腹泻的主要原因,目前临床诊断仅针对猫细小病毒(Felineparvovirus,FPV)具有较完善的诊断与诊疗系统,2018年后陆续出现报道的猫库布病毒(Felinekobuvirus,FeKoV),猫博卡病毒(Felinebocavirus,FBoV)和新型猫星状病毒(Felineastrovirus,FeAstV),这些病毒在针对腹泻猫的病原学调查中易被忽略。[0003]猫细小病毒是一种小型的,无包膜的单链DNA病毒,是食肉动物原病毒属1的成员,属于细小病毒科原病毒属。具有高度传染性,主要通过