快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115951050A(43)申请公布日2023.04.11(21)申请号202211244449.3G01N33/548(2006.01)(22)申请日2022.10.12(71)申请人中国农业科学院都市农业研究所地址610000四川省成都市双流区（天府新区）兴隆街道天明社区蜡梓东街36号(72)发明人王琦曹丽艳郑海学万颖孔祥雨张宇段月月袁聪(74)专利代理机构郑州大通专利商标代理有限公司41111专利代理师张立强(51)Int.Cl.G01N33/569(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/577(2006.01)G01N33/533(2006.01)权利要求书2页说明书5页序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条及其制备方法(57)摘要本发明涉及快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条及其制备方法。试纸条包括PVC底板，样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接在PVC底板上；硝酸纤维素膜上设有检测线T和质控线C。结合垫包被荧光微球标记的抗SADS‑CoVN蛋白的单克隆抗体和羊抗兔IgG，检测线T线处包被抗SADS‑CoVN蛋白的单克隆抗体，质控线C线处包被羊抗兔IgG。本试纸条能特异性识别SADS‑CoV，且与临床症状相似的其他猪源肠道冠状病毒不发生反应。该试纸条特异性好、灵敏性较高、操作简单、12min内判读结果，借助荧光定量检测仪还可以实现定量检测，检测结果的数字化避免了人主观性偏差。CN115951050ACN115951050A权利要求书1/2页1.快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括PVC底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接在PVC底板上；所述的硝酸纤维素膜上设有检测线T和质控线C，所述的检测线T设置于靠近结合垫的一端，所述的质控线C设置于靠近吸水垫的一端；所述结合垫包被有荧光微球标记的抗SADS‑CoVN蛋白的单克隆抗体和羊抗兔IgG；所述检测线T包被有抗SADS‑CoVN蛋白的单克隆抗体；所述质控线C包被有羊抗兔IgG。2.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的抗SADS‑CoVN蛋白的单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示、轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。3.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫的制备方法为：（1）将结合垫采用结合垫封闭液浸泡处理；（2）将荧光微球用N‑乙基‑N′‑(3‑二甲基氨丙基)碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺活化后，离心，用硼酸缓冲液重悬，超声使荧光微球分散，随后分别加入抗SADS‑CoVN蛋白的单克隆抗体、羊抗兔IgG，室温孵育，再加入荧光微球标记物封闭液，室温孵育，离心；用荧光微球标记物保护剂将沉淀重悬，即得抗SADS‑CoVN蛋白的单克隆抗体标记溶液和羊抗兔IgG的荧光微球标记溶液；（3）将制备的抗SADS‑CoVN蛋白的单克隆抗体标记溶液和羊抗兔IgG的荧光微球标记溶液1:1混合后喷洒在封闭好的结合垫上；所述SADS‑CoVN蛋白单克隆抗体荧光微球标记溶液组成为：每1ml荧光微球溶液含80µgSADS‑CoVN蛋白单克隆抗体；所述羊抗兔IgG荧光微球标记溶液组成为：每1ml荧光微球溶液含100µg羊抗兔IgG。4.根据权利要求3所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫封闭液为含有5%m/v海藻糖、2%m/vBSA、0.5%v/vTween‑20、0.5%m/vTritonX‑100的硼酸溶液。5.根据权利要求3所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球标记物封闭液为含有10%m/vBSA的超纯水溶液。6.根据权利要求3所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球标记物保护剂为含有3%m/v蔗糖、1%m/vPVP‑40、0.5%v/vTween‑20的PBS溶液。7.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测线T包被有1mg/ml的SADS‑CoVN蛋白单克隆抗体。8.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述质控线C包被有0.5mg/ml的羊抗兔IgG。9.根据权利要求1所述的快速检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述样品垫采用样品垫