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本发明公开了一种快速检测肺癌血清肿瘤标志物的免疫层析试纸条及其制备方法,所述试纸条包括底板,所述底板上依次排列样品垫、金标垫、NC膜及吸水纸;所述NC膜粘附于底板上,自吸水纸方向依次设置质控线(C线),细胞角蛋白19片段检测线(T1线)和癌胚抗原检测线(T2线);所述金标垫和样品垫设置在NC膜下端,吸水纸设置在NC膜上端,所述样品垫、金标垫、NC膜和吸水纸重叠设置。本试纸可以快速实现全血中的细胞角蛋白19片段(CYFRA21?1)、癌胚抗原(CEA)的同时检测,操作简易,可视化的结果判读,灵敏度高、特异性强,成本低,无需专业人员和大型仪器,适用于肺癌高风险人群的监测及肺癌术后预后,不受地域和时间的限制,适用于家庭和社区。