菜豆荚长基因紧密连锁的分子标记的引物及其选育方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927693A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210669297.5(22)申请日2022.06.14(71)申请人浙江省农业科学院地址310021浙江省杭州市石桥路198号(72)发明人吴新义李貌吴苏淇汪宝根李国景吴晓花鲁忠富汪颖王尖(74)专利代理机构杭州创信知识产权代理有限公司33383专利代理师阴知见(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图2页(54)发明名称菜豆荚长基因紧密连锁的分子标记的引物及其选育方法(57)摘要本发明涉及一种菜豆荚长基因紧密连锁的分子标记Pv_0026128及其KASP引物序列，该标记位于1号染色体上19213953bp的位置，可利用该标记扩增需要鉴定的材料，根据其基因型判断样本是否携带控制荚长的等位变异。利用本发明提供的分子标记及其引物可以实现对菜豆荚长性状的辅助筛选，在短时间内进行高通量检测，与传统基于表型选择相比，选择结果更准确，便于快速筛选出具有豆荚荚长的菜豆品种或品系，提高菜豆产量。结合KASP的选育方法也大大提高育种效率，从而加快菜豆育种进程。CN115927693ACN115927693A权利要求书1/1页1.检测菜豆荚长基因紧密连锁的分子标记的KASP引物，其特征在于，所述分子标记为Pv_0026128，位于菜豆基因组Phaseolusvulgarisv2.11号染色体19213953bp处，多态性为C/T，检测所述分子标记的KASP引物为以下具体序列：Pv_0026128KASP引物：Pv_0026128Primer1：5’‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGTTGCTTCAACCTGGAGC‑3’；Pv_0026128Primer2：5’‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAGTTGCTTCAACCTGGAGT‑3’；Pv_0026128Primer1和Pv_0026128Primer2为2条特异性引物，分别连接不同的荧光序列；Pv_0026128Primer_Common：5’‑TAAGTAATTGTTATCGCTTGCTGACCT‑3’。2.权利要求1所述KASP引物，其特征在于，其中Pv_0026128Primer1连接FAM基团，Pv_0026128Primer2连接HEX基团。3.权利要求1或2所述KASP引物、含有KASP引物的试剂或试剂盒在检测菜豆荚长基因中的应用。4.利用权利要求1所述检测菜豆荚长基因紧密连锁的分子标记的KASP引物进行选育不同菜豆荚长品种的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：S1、提取菜豆植株样本基因组DNA；S2、以菜豆植株样本基因组DNA为模板，利用Pv_0026128KASP引物进行KASP反应检测；所述Pv_0026128KASP引物为：Pv_0026128Primer1：5’‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGTTGCTTCAACCTGGAGC‑3’；Pv_0026128Primer2：5’‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAGTTGCTTCAACCTGGAGT‑3’；Pv_0026128Primer1和Pv_0026128Primer2为2条特异性引物，分别连接不同的荧光基团；Pv_0026128Primer_Common：5’‑TAAGTAATTGTTATCGCTTGCTGACCT‑3’；S3、读取KASP反应检测的荧光信号，若菜豆植株样本基因组DNA显示Pv_0026128Primer1所带荧光基团信号，则即可判断该样本携带长荚性状基因型；若菜豆植株样本基因组DNA显示Pv_0026128Primer2所带荧光基团信号，则即可判断该样本携带短荚性状基因型。5.根据权利要求4所述的选育不同荚长的菜豆品种的方法，其特征在于，其中Primer1连接FAM基团，Primer2连接HEX基团。6.根据权利要求5所述的选育不同荚长的菜豆品种的方法，其特征在于，KASP反应检测还包括2XKASPMastermix试剂。7.根据权利要求6所述的选育不同荚长的菜豆品种的方法，其特征在于，KASP反应检测的PCR体系为：DNA0.8μl，2xKASPMastermix0.8μl。8.根据权利要求7所述的选育不同荚长的菜豆品种的方法，其特征在于，KASP反应检测的PCR反应程序为94℃预变性15分钟，94℃变性20秒，61～55℃梯度复性60秒，每个循环复性温度降低0.6℃，55℃延伸60秒，循环10次，；再94℃变性20秒，55℃复性60秒，延伸60秒，循环26次。2CN1