豇豆抗锈病基因紧密连锁的分子标记及其选育方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114941038A(43)申请公布日2022.08.26(21)申请号202210259081.1(22)申请日2022.03.16(71)申请人浙江省农业科学院地址310021浙江省杭州市石桥路198号(72)发明人吴新义董君暘汪宝根吴晓花李国景鲁忠富汪颖王尖(74)专利代理机构杭州创信知识产权代理有限公司33383专利代理师杜海东(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书6页序列表2页附图2页(54)发明名称豇豆抗锈病基因紧密连锁的分子标记及其选育方法(57)摘要本发明涉及一种豇豆抗锈病基因紧密连锁的分子标记，具体所述分子标记位于11号染色体上2_05026和2_25169，其序列如SEQNo.1和SEQNo.2所示。还提供与抗锈病基因紧密连锁的KASP标记引物，可快速、简便、高通量检测豇豆植株是否具有豇豆锈病抗性，利用该标记扩增需要鉴定的材料，根据其基因型判断这些单株是否携带抗锈病目的基因。相比较常规育种方法中对锈病的抗性鉴定比较繁琐和鉴定技术要求比较高的情况，利用本发明提供的分子标记及其引物进行抗锈病单株的辅助筛选，可以在短时间内进行高通量检测，与田间鉴定相比，不受试验用地限制，可以在苗期进行淘汰，大大节省人力物力，从而加快豇豆具有抗锈病育种进程，提高育种效率。CN114941038ACN114941038A权利要求书1/2页1.豇豆抗锈病基因紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于11号染色体上2_05026和2_25169，其序列如SEQNo.1和SEQNo.2所示。2.检测权利要求1所述分子标记的引物，其特征在于，所述引物为包括以下具体序列：a.2_05026KASP引物：2_05026Primer1：5’‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCCCTTTCTTGCAGTTTTTT‑3’；2_05026Primer2：5’‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCCCTTTCTTGCAGTTTTTC‑3’；2_05026Primer1和2_05026Primer2为2条特异性引物，分别连接不同的荧光序列；2_05026Primer_Common：5’‑AAGTRTACCCCAAAAACGACATGCTTGTTG‑3；b.2_25169KASP引物：2_25169Primer1：5’‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGACCAGCAGAGGAAAGGAGTTGATG‑3’；2_25169Primer2：5’‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGACCAGCAGAGGAAAGGAGTTGATA‑3’；2_25169Primer1和2_25169Primer2为2条特异性引物，分别连接不同的荧光序列；2_25169Primer_Common：5’‑ACTCATGCATTTGCTTGSGTACTCC‑‑3’。3.权利要求2所述引物、含有引物的试剂或试剂盒在检测豇豆抗锈病基因中的应用。4.利用权利要求1所述豇豆抗锈病基因紧密连锁的分子标记进行选育抗锈病豇豆品种的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：S1、提取豇豆植株样本基因组DNA；以及对照样本豇豆品种G93和豇豆品种特早30的DNA；S2、以各豇豆植株样本基因组DNA为模板，利用2_05026KASP引物和2_25169KASP引物进行KASP反应检测；所述2_05026KASP引物为：2_05026Primer1：5’‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCCCTTTCTTGCAGTTTTTT‑3’；2_05026Primer2：5’‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCCCTTTCTTGCAGTTTTTC‑3’；2_05026Primer1和2_05026Primer2为2条特异性引物，分别连接不同的荧光基团；2_05026Primer_Common：5’‑AAGTRTACCCCAAAAACGACATGCTTGTTG‑3；所述2_25169KASP引物为：2_25169Primer1：5’‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGACCAGCAGAGGAAAGGAGTTGATG‑3’；2_25169Primer2：5’‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGACCAGCAGAGGAAAGGAGTTGATA‑3’；2_25169Primer1和2_25169Primer2为2条特异性引物，分别连接不同的荧光基团；2_25169Primer_Common：5’‑ACTCATGCATTTGCTTGSGTACTCC‑‑3’；S3、读取KASP反应检测的荧光信号，若豇豆植株