与西瓜绿色花瓣基因Clgf紧密连锁的分子标记及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114292954A(43)申请公布日2022.04.08(21)申请号202210105137.8(22)申请日2022.01.26(71)申请人河南农业大学地址450002河南省郑州市金水区文化路95号(72)发明人杨路明刘东明朱华玉杨森豆峻岭孙东玲(74)专利代理机构北京华际知识产权代理有限公司11676代理人袁瑞红(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图2页(54)发明名称与西瓜绿色花瓣基因Clgf紧密连锁的分子标记及其应用(57)摘要本发明公开了两对与西瓜绿花基因Clgf紧密连锁的分子标记及应用，属于生物技术领域。本发明利用亲本和F2群体进行表型鉴定，根据BSA原理，利用SSR标记对绿花性状相关基因进行初步定位。结合亲本的重测序开发SSR、Indel标记，在父母本进行多态性筛选，用具有多态性的引物在F2群体中进行基因型鉴定，将西瓜绿花基因Clgf定位在标记ClSSR30082和Indel186之间。本发明的分子标记可为鉴定西瓜花色提供新手段，加速西瓜育种的改良进程，提高育种的准确性和选择效率。CN114292954ACN114292954A权利要求书1/1页1.与西瓜绿色花瓣基因Clgf紧密连锁的SSR分子标记，其特征在于，扩增所述分子标记的引物对的上游引物序列如SEQIDNO.1所示，下游引物序列如SEQIDNO.2所示。2.与西瓜绿色花瓣基因Clgf紧密连锁的Indel分子标记，其特征在于，扩增所述分子标记的引物对的上游引物序列如SEQIDNO.5所示，下游引物序列如SEQIDNO.6所示。3.权利要求1或权利要求2所述的与西瓜绿色花瓣基因Clgf紧密连锁的分子标记在西瓜分子育种中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述分子标记用于鉴定或辅助鉴定西瓜花瓣颜色性状。5.一种西瓜绿色花瓣品种的判定方法，其特征在于，所述判定方法包括如下步骤：(1)提取待测西瓜基因组DNA；(2)以步骤(1)中所提取基因组DNA为模板，利用权利要求1所述分子标记的引物对进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行电泳检测和/或测序；(3)根据步骤(2)的电泳条带和/或测序结果进行判定，具体标准为：如果PCR扩增产物仅有一条如SEQIDNO.4所示的长度为248bp的特征条带，则该待测品种为西瓜绿色花瓣性状的品种；如果PCR扩增产物仅有一条如SEQIDNO.3所示的长度为268bp的特征条带，则待测品种为纯合西瓜黄色花瓣性状品种；如果PCR扩增产物中既有一条如SEQIDNO.3所示的长度为248bp的特征条带，又有一条如SEQIDNO.4所示的长度为268bp的特征条带，则该待测品种为杂合西瓜黄色花瓣性状品种。6.一种西瓜绿色花瓣品种的判定方法，其特征在于，所述判定方法包括如下步骤：(1)提取待测西瓜基因组DNA；(2)以步骤(1)中所提取基因组DNA为模板，利用权利要求2所述分子标记的引物对进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行电泳检测和/或测序；(3)根据步骤(2)的电泳条带和/或测序结果进行判定，具体标准为：如果PCR扩增产物仅有一条如SEQIDNO.7所示的长度为82bp的特征条带，则该待测品种为西瓜黄色花瓣性状的品种；如果PCR扩增产物仅有一条如SEQIDNO.8所示的长度为76bp的特征条带，则待测品种为纯合西瓜绿色花瓣性状品种；如果PCR扩增产物中既有一条如SEQIDNO.7所示的长度为82bp的特征条带，又有一条如SEQIDNO.8所示的长度为76bp的特征条带，则该待测品种为杂合西瓜黄色花瓣性状品种。7.一种用于鉴定西瓜绿色花瓣性状的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1或权利要求2中所述的引物对。8.用于检测SSR分子标记是否存在的试剂在西瓜花瓣颜色基因定位中的应用，其特征在于，扩增所述标记的引物对的上游引物序列如SEQ.ID.NO.1所示，下游引物序列如SEQ.ID.NO.2所示。9.用于检测Indel标记是否存在的试剂在西瓜花瓣颜色基因定位中的应用，其特征在于，扩增所述标记的引物对的上游引物序列如SEQ.ID.NO.5所示，下游引物序列如SEQ.ID.NO.6所示。2CN114292954A说明书1/7页与西瓜绿色花瓣基因Clgf紧密连锁的分子标记及其应用技术领域[0001]本发明属于分子生物学领域，具体涉及与西瓜绿色花瓣基因Clgf紧密连锁的分子标记及其应用。背景技术[0002]花色是植物遗传的重要性状，主要吸引昆虫授粉。花色可以影响蚜虫取食，生产中选育不同花色的作物品种具有降低蚜虫传病的作用，也可以维持花瓣的能量平衡，避免花器官受伤害。花色是