玉米南方锈病抗性基因紧密连锁标记及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113897352A(43)申请公布日2022.01.07(21)申请号202010572345.X(22)申请日2020.06.22(71)申请人北京市农林科学院地址100097北京市海淀区曙光花园中路9号(72)发明人宋伟王帅赵久然张如养苏爱国王元东邢锦丰王帅帅(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C12N15/11(2006.01)C12Q1/6895(2018.01)A01H1/02(2006.01)A01H1/04(2006.01)权利要求书2页说明书6页序列表1页附图2页(54)发明名称玉米南方锈病抗性基因紧密连锁标记及其应用(57)摘要本发明公开了一种玉米南方锈病抗性基因紧密连锁标记及其应用。本发明保护特异引物对，由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的单链DNA分子组成。本发明利用不同材料序列的插入/缺失所设计特异性标记组合，利用该标记通过毛细管电泳技术可快速准确的鉴定不同玉米材料的南方锈病抗性，能够解决在南方锈病高发地之外的地区鉴定困难、周期长等难题；同时，能够克服RFLP、RAPD、AFLP等检测方法存在的操作复杂、稳定性和重复性差以及费用昂贵等缺点。本发明提供的分子标记鉴定方法操作简单，检测结果准确可靠，可用于玉米南方锈病抗性的鉴定及辅助选择育种，能够克服常规育种年限长和效率低等困难。CN113897352ACN113897352A权利要求书1/2页1.特异引物对；所述特异引物对由引物F和引物R组成；所述引物F为如下(a1)或(a2)：(a1)SEQIDNo.1所示的单链DNA分子；(a2)将SEQIDNo.1经过一个或几个核苷酸的取代且与SEQIDNo.1具有相同功能的DNA分子；所述引物R为如下(a3)或(a4)：(a3)SEQIDNo.2所示的单链DNA分子；(a4)将SEQIDNo.2经过一个或几个核苷酸的取代且与SEQIDNo.2具有相同功能的DNA分子。2.权利要求1所述特异引物对的应用，为如下(b1)-(b6)中的至少一种：(b1)鉴定或辅助鉴定玉米南方锈病抗性；(b2)筛选或辅助筛选玉米南方锈病抗病植株；(b3)筛选或辅助筛选玉米南方锈病感病植株；(b4)制备用于鉴定或辅助鉴定玉米南方锈病抗性的试剂盒；(b5)制备用于筛选或辅助筛选玉米南方锈病抗病植株的试剂盒；(b6)制备用于筛选或辅助筛选玉米南方锈病感病植株的试剂盒。3.含有权利要求1所述特异引物对的试剂盒；所述试剂盒的应用为如下(c1)-(c3)中的至少一种：(c1)鉴定或辅助鉴定玉米南方锈病抗性；(c2)筛选或辅助筛选玉米南方锈病抗病植株；(c3)筛选或辅助筛选玉米南方锈病感病植株。4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将权利要求1所述的特异引物对中的各条引物进行独立包装的步骤。5.鉴定或辅助鉴定玉米南方锈病抗性的方法，包括如下步骤：(1)检测待测玉米基因型，方法如下：提取待测玉米植株的基因组DNA；以所述基因组DNA为模板，采用权利要求1所述的特异引物对对模板进行PCR扩增并通过毛细管电泳检测，如果扩增产物含有156bp大小的扩增片段且不含有148bp大小的扩增片段，则待测玉米基因型为156/156；如果扩增产物含有148bp大小的扩增片段且含有156bp大小的扩增片段，则待测玉米基因型为148/156；如果扩增产物含有148bp大小的扩增片段且不含有156bp大小的扩增片段，则待测玉米基因型为148/148；(2)根据步骤(1)的分型结果，判断玉米南方锈病抗性；基因型为156/156的植株对南方锈病的抗性高于基因型为148/156和148/148的植株；基因型为148/156的植株对南方锈病的抗性高于基因型为148/148的植株；基因型为156/156和148/156的玉米植株表现为抗南方锈病；基因型为148/148的玉米植株表现为感南方锈病。6.筛选或辅助筛选玉米南方锈病抗病植株的方法，包括如下步骤：(d1)按照权利要求5所述方法鉴定玉米南方锈病抗性；(d2)基于步骤(d1)的结果筛选玉米南方锈病抗病植株。7.筛选或辅助筛选玉米南方锈病感病植株的方法，包括如下步骤：2CN113897352A权利要求书2/2页(e1)按照权利要求5所述方法鉴定玉米南方锈病抗性；(e2)基于步骤(e1)的结果筛选玉米南方锈病感病植株。8.权利要求1所述的特异引物对，或，权利要求5-7任一所述的方法在玉米育种中的应用。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述育种的目的是为了筛选南方锈病抗病玉米自交系或南方锈病感病玉米自交系。10.玉米育种方法，为方法A或方法B；所述方法A包括如下步骤：将权利要求6筛选得到的南