一株能稳定分泌抗芋螺毒素μ-KIIIA-CTX单克隆抗体的杂交瘤细胞株.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115948346A(43)申请公布日2023.04.11(21)申请号202211280518.6G01N33/577(2006.01)(22)申请日2022.10.19G01N33/68(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNo.450042021.12.03(71)申请人福建农林大学地址350002福建省福州市仓山区上下店路15号(72)发明人王荣智唐恒坤汪世华吴惠娟杨敏仪陈睿凌素美(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100专利代理师林文弘蔡学俊(51)Int.Cl.C12N5/20(2006.01)权利要求书1页说明书9页C07K16/18(2006.01)序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称一株能稳定分泌抗芋螺毒素μ-KIIIA-CTX单克隆抗体的杂交瘤细胞株(57)摘要本发明具体涉及一株能分泌芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体的杂交瘤细胞株3E11。杂交瘤细胞株3E11的分类命名为抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体杂交瘤细胞株，其已于2021年12月03日在中国普通微生物菌种保藏管理中心登记保藏，保藏编号为CGMCCNo.45004。杂交瘤细胞株3E11分泌的抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体特异性强、亲和力大、效价高，基于杂交瘤细胞株3E11及其所分泌的单克隆抗体，本发明建立了一种ELISA免疫检测方法，该检测方法可应用于芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX的检测中，且具有准确性强、灵敏度高、操作简便的优势。CN115948346ACN115948346A权利要求书1/1页1.一株杂交瘤细胞株3E11，其特征在于：所述的杂交瘤细胞株3E11分类命名为抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体杂交瘤细胞株，已于2021年12月03日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCCNo.45004。2.一种抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体，其特征在于：所述的抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体亚型为IgG1，其由保藏编号为CGMCCNo.45004的杂交瘤细胞株3E11分泌产生；所述的抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体的VH可变区序列和VL可变区序列分别如SEQIDNO.9和SEQIDNO.10所示。3.一种制备权利要求2所述的抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体的方法，其特征在于：将杂交瘤细胞株3E11，通过制备腹水和纯化，获得所述的抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体。4.如权利要求2所述的抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体在检测芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX中的应用。5.一种芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX检测试剂盒，其特征在于：所述的芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX检测试剂盒包含权利要求2所述的抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体。2CN115948346A说明书1/9页一株能稳定分泌抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体的杂交瘤细胞株技术领域[0001]本发明属于抗体工程与免疫检测领域，具体涉及一株能分泌抗芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体的杂交瘤细胞株3E11。背景技术[0002]芋螺毒素（Conotoxin，CTX），由生活在热带海洋中的肉食性软体动物芋螺分泌，是用于麻醉猎物的小肽类毒素。它们是由10~41个氨基酸残基组成的，是富含半胱氨酸的动物神经肽毒素。具有特异性结合动物体内各种离子通道和受体的特殊功能。芋螺毒素种类繁多，结构新颖，选择性强，疗效确切，在成瘾、麻醉、镇痛和研究治疗精神疾病、癌症和心脏疾病等方面具有极好的应用前景，已成为神经科学研究和新药研发的新来源。[0003]芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX是从木下芋螺（Asprellakinoshitai）中发现的新超家族芋螺毒素，属于M‑基因超家族，μ家族。芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX含有16个氮基酸，可特异性作用于钠离子通道受体。含有六个半胱氨酸模式，其中自然状态下的二硫键连接方式主要是Cysl‑Cys9，Cys2‑Cys15和Cys4‑Cys16。[0004]芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX作为其家族中结构最简单的一员，其特异性作用的电压门控钠通道(NaVs)已被证明在动物和人类的疼痛中发挥重要作用，近年来的研究比较热门。但芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX的检测方法未有报道，也未有关于芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体的开发和应用，因此开展关于芋螺毒素μ‑KIIIA‑CTX单克隆抗体的制备及建立基于单克隆抗体的免疫检测方法具有重要意义。[0005]酶联免疫吸附（ELISA）技术是建立在免疫学基础上发展起