一株分泌抗平足蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106947744A(43)申请公布日2017.07.14(21)申请号201710150482.2C07K16/18(2006.01)(22)申请日2017.03.14G01N33/68(2006.01)G01N33/574(2006.01)(83)生物保藏信息C07K19/00(2006.01)CGMCCNO.135892017.01.09(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人汪世华杨清海谢成杰陈惠玲王荣智凌素美曾林茂肖诗伟(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100代理人蔡学俊陈彩芳(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书6页C12N5/20(2006.01)序列表1页附图2页(54)发明名称一株分泌抗平足蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用(57)摘要本发明提供一株分泌抗平足蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，还提供了一种分泌的可特异性识别人平足蛋白（Podoplanin，PDPN）的单克隆抗体，目的是提供一种将该抗体用于多种肿瘤免疫学诊断的应用方法。PDPN蛋白是一个38kDO-链接的横跨膜唾液酸糖蛋白，通常用于标记组织中的淋巴管内皮，制备该抗体的抗原为一段优选的、由大肠杆菌表达、具有免疫原性活性的重组蛋白，最终获得的抗体属于IgG2b亚型，对多种肿瘤组织的免疫组织化学检测发现，该抗体可以很好的鉴别肿瘤的发生，可用于这些肿瘤的免疫学诊断。CN106947744ACN106947744A权利要求书1/1页1.一株分泌抗平足蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系5B3D4，该细胞系已于2017年1月9日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCCNO.13589。2.一种单克隆抗体，其特征在于：所述抗体由小鼠杂交瘤细胞系5B3D4分泌。3.权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于：其免疫小鼠用的抗原是将具有序列表中SEQIDNo.1的核苷酸序列编码经由大肠杆菌重组表达而获得的重组PDPN抗原蛋白。4.权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于：该PDPN抗原蛋白由具有抗原性的PDPN片段及用于重组蛋白纯化的蛋白标签组成。5.按照权利要求4所述的单克隆抗体，其特征在于：PDPN片段包括第23位至第131位氨基酸的片段，用于纯化的标签是由5至7个组氨酸组成的。6.权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于：其为小鼠IgG2b亚型单克隆抗体。7.权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于：其识别重组和肿瘤细胞表面的PDPN蛋白。8.权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于：其用于免疫组织化学法和酶联吸附测定法检测肿瘤及正常组织细胞中的PDPN表达情况。9.权利要求2所述的单克隆抗体在制备免疫组化病理诊断剂上的应用。2CN106947744A说明书1/6页一株分泌抗平足蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种可以识别人平足蛋白的单克隆抗体及可分泌该抗体的杂交瘤细胞系。具体而言，本发明提供了一种抗肿瘤细胞表面抗原PDPN的单克隆抗体，该抗体可以用于通过人工或自动化方式，以免疫组织化学染色（IHC）、酶联免疫吸附（ELISA）或免疫印迹（WesternBlot）方式检测细胞中PDPN的表达水平，从而对这些肿瘤进行诊断，属于生物检测领域。背景技术[0002]PDPN蛋白又称肾小球上皮细胞整合膜蛋白，1996年由Wetterwald首次发现并报道，而后Breiteneder等发现其还存在于小鼠的肾小球足状突细胞膜表面蛋白，与维持肾小球通透性及足状突细胞突起的形成有关。在Breiteneder等的进一步研究中发现，PDPN特异性表达于淋巴管，而不表达于血管，可作为淋巴管内皮标记物。[0003]PDPN蛋白是一种相对分子量为38kDa的Ⅰ型跨膜唾液酸糖蛋白，由162个氨基酸组成，可分为4个部分：第一部分为第1位至第22位氨基酸组成的信号肽片段，第二部分为第23位至第131位氨基酸编码的胞外片段，第三部分为第132位至第152位氨基酸编码的跨膜片段，第四部分为第153位至第162位氨基酸组成的胞浆片段。[0004]PDPN蛋白不只在淋巴管内皮表达，也在人体很多组织细胞表达，如肾足突细胞、骨骼肌、肺、心脏和乳腺的肌成纤维细胞、唾液腺、成骨细胞、卵巢粒层细胞、滤泡树突状细胞和间皮细胞等。近年来，越来越多研究发现在多种人类肿瘤中PDPN表达由无到有或表达上调，包括口腔鳞癌、喉癌、肺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、膀肤癌、食管癌、结直肠癌、皮肤癌、淋巴瘤、牙源性细胞瘤、卵巢无性生殖细胞瘤及粒