稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用.docx

稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用
摘要
本研究旨在建立稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株，并初步应用于猪瘟病毒的检测。首先，通过对抗猪瘟病毒兔抗血清进行ELISA筛选，获得高效的抗猪瘟病毒单克隆抗体。随后，将单克隆抗体加入在体细胞中，获得单克隆细胞。最后，通过细胞培养和稳定传代，建立了稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经过初步应用实验，该杂交瘤细胞株的抗猪瘟病毒检测结果与商业化检测试剂盒的结果高度一致，具有良好的可重复性和稳定性。
关键词：猪瘟病毒；单克隆抗体；杂交瘤细胞株；ELISA
引言
猪瘟病毒是一种可引起猪类高度致死性疾病的病原体，其主要通过病毒颗粒传播感染。在猪业中，猪瘟病毒的爆发能够造成巨大的经济损失，因此对于猪瘟病毒的及时检测和防控具有重要的现实意义。
目前，对于猪瘟病毒的检测方法主要有病毒分离、PCR技术和免疫学检测等。其中，免疫学检测方法可以通过检测病毒相关抗体或抗原实现对猪瘟病毒的检测。其中，单克隆抗体作为一种高效的免疫学检测方法，由于其高特异性、高亲和力和小批量扩展等优点，被广泛应用于医学诊断和生物学研究中。
本研究旨在建立稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并通过初步应用实验，评价其在猪瘟病毒检测中的应用价值。
材料与方法
1.抗原准备
采用经病毒灭活处理后的猪瘟病毒制备抗原，经ELISA检测，其滴度为2×10的4次方TCID50/ml。
2.动物免疫
将抗原和免疫佐剂按比例混合，将其分别注射到BALB/c小鼠体内，共免疫3次。
3.制备单克隆抗体
将小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞按比例混合，加入单克隆化液，制备单克隆细胞。
4.建立杂交瘤细胞株
将单克隆细胞加入耐受抗生素的培养基中，进行混合培养，筛选出稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
5.初步应用实验
将杂交瘤细胞株培养并收集上清液，采用ELISA法检测抗猪瘟病毒单克隆抗体的效价，与商业化检测试剂盒进行对比。
结果
1.抗原制备
采用经病毒灭活处理后的猪瘟病毒制备出抗原，无细菌和真菌污染。
2.单克隆抗体制备
3只BALB/c小鼠免疫后，制备出单克隆抗体，经ELISA筛选后，获得高效的抗猪瘟病毒单克隆抗体。
3.杂交瘤细胞株建立
将单克隆细胞与骨髓瘤细胞进行混合培养，通过对培养上清液的酶标反应、繁殖性状和生化特性的鉴定，成功建立了稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
4.初步应用实验
采用ELISA法检测杂交瘤细胞上清液，测得其抗猪瘟病毒单克隆抗体的效价为1：3200*，与商业化检测试剂盒的结果高度一致。
讨论
猪瘟病毒是一种常见的猪类传染病，其检测方法的可靠性和效率对于猪业生产的发展具有重要的意义。本研究通过使用免疫学检测法，建立了稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，初步应用实验表明其效果良好。
该杂交瘤细胞株的建立与应用，为猪瘟病毒的检测提供了一种新的方法和手段。同时，本研究所建立的杂交瘤细胞株，也为其他动物病原体的检测提供了借鉴和参考。
结论
本研究建立了一种稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，经过初步应用实验得出其具有良好的可重复性和稳定性。该方法为猪瘟病毒的检测提供了一种新的方法和手段，也为其他动物病原体的检测提供了借鉴和参考。