一株分泌抗嗜铬素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107090439A(43)申请公布日2017.08.25(21)申请号201710405899.9C07K16/30(2006.01)(22)申请日2017.06.02G01N33/574(2006.01)C12R1/91(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNO.135902017.01.09(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人汪世华杨清海谢成杰陈惠玲张丹萍贾坤志(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100代理人蔡学俊(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书6页C12N5/20(2006.01)序列表1页附图2页(54)发明名称一株分泌抗嗜铬素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用(57)摘要本发明提供一株分泌抗嗜铬素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，还提供了一种分泌的可特异性识别人嗜铬素A的单克隆抗体，用于多种肿瘤免疫学诊断的应用方法。CgA蛋白是人类肾上腺髓质中含量最高的一种可溶性酸性蛋白，分子量为48kD，广泛存在于神经元及其神经内分泌细胞和肿瘤细胞中。CgA蛋白表达与神经内分泌肿瘤相关，被用于标记神经内分泌肿瘤，从而用于神经内分泌肿瘤的诊断。制备该抗体的抗原为一段由大肠杆菌表达、具有免疫原性活性的重组蛋白，最终获得的抗体属于IgG2b亚型，对多种肿瘤组织的免疫组织化学检测发现，该抗体可以很好的鉴别肿瘤的发生，可用于这些肿瘤的免疫学诊断。CN107090439ACN107090439A权利要求书1/1页1.一株分泌抗嗜铬素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系4E5C6-11G6，该细胞株已于2017年1月9日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCCNO.13590。2.一种单克隆抗体，其特征在于：所述抗体由权利要求1所述的小鼠杂交瘤细胞系4E5C6-11G6分泌。3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于：其免疫小鼠用的抗原是将具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列编码经由大肠杆菌重组表达而获得的重组CgA抗原蛋白。4.根据权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于：该CgA抗原蛋白由具有抗原性的CgA片段及用于重组蛋白纯化的蛋白标签组成。5.根据权利要求4所述的单克隆抗体，其特征在于：CgA片段包括第19位至第457位氨基酸的片段，用于纯化的标签是由5至7个组氨酸组成的。6.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于：其为小鼠IgG2b亚型单克隆抗体。7.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于：其识别重组和肿瘤细胞胞浆的CgA蛋白。8.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于：其用于免疫组织化学法和酶联吸附测定法检测肿瘤及正常组织细胞中的CgA表达情况。9.如权利要求2所述的单克隆抗体在制备免疫组化病理诊断剂上的应用。2CN107090439A说明书1/6页一株分泌抗嗜铬素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种可以识别人嗜铬素A的单克隆抗体及可分泌该抗体的杂交瘤细胞系4E5C6-11G6。具体而言，本发明提供了一种抗肿瘤细胞胞浆抗原CgA的单克隆抗体，该抗体可以用于通过人工或自动化方式，以免疫组织化学染色（IHC）、酶联免疫吸附（ELISA）或免疫印迹（WesternBlot）方式检测细胞中CgA的表达水平，从而对这些肿瘤进行诊断，属于生物检测领域。背景技术[0002]CgA蛋白是一种酸性亲水蛋白质，是嗜铬家族的一员，位于神经内分泌细胞的嗜铬性颗粒内。研究发现，几乎所有类型的神经内分泌肿瘤均出现CgA表达上调。因此，CgA被认为是神经内分泌肿瘤的非特异性标志物，用于该类肿瘤的诊断以及肿瘤发展进程的监测和预后判断。[0003]人源CgA蛋白分子量为48kD，包括457个氨基酸，其编码基因位于第14号染色体上。CgA蛋白含有一些公认的结构/功能区域：含有18个氨基酸的信号肽在蛋白成熟过程中被剪切；10对基本氨基酸残基可能是分裂或加工的产物；两个半胱氨酸残基结合形成一个分子内的二硫化物环；含有和胰岛素释放抑制剂相同的氨基酸序列；和已知的钙粘蛋白（如癌调蛋白、S-100蛋白）拥有同源序列；一个精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）复合物，可能作为细胞膜的组成部分。[0004]CgA蛋白在神经元和内分泌组织中发现，包括脑下垂体、胰腺、下丘脑、胸腺、甲状腺和甲状旁腺等。此外，神经内分泌肿瘤与CgA表达水平密切相关，该类肿瘤包括前列腺癌、嗜铬细胞癌、大细胞癌、鳞癌、肺腺癌、胰高血糖素癌和胰岛素癌等。[0005]目前的研究表明CgA有