一种S．trachelii的LAMP检测引物、检测试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110172527A(43)申请公布日2019.08.27(21)申请号201910541160.XC12R1/645(2006.01)(22)申请日2019.06.20(71)申请人南京林业大学地址210037江苏省南京市玄武区龙蟠路159号(72)发明人郑新月熊琴王维钱雨琳李雪张晨(74)专利代理机构南京申云知识产权代理事务所(普通合伙)32274代理人邱兴天(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6844(2018.01)C12Q1/04(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图1页(54)发明名称一种S．trachelii的LAMP检测引物、检测试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种S.trachelii的LAMP检测引物、检测试剂盒及其应用。该LAMP检测引物由正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3、正向环引物LF和反向环引物LB组成；检测试剂盒包括LAMP检测引物、LAMP反应液。本发明根据S.trachelii的核糖体内转录间隔区设计引物，采用LAMP技术进行检测，特异性强、灵敏度高，具有快速、准确性高、现场应用方便等优点，解决了现有S.trachelii检测技术中存在的周期长、灵敏度低、成本高、现场应用困难等缺陷，对S.trachelii检疫鉴定、监测和减少对农药盲目使用方面具有重要意义。CN110172527ACN110172527A权利要求书1/1页1.一种S.trachelii的LAMP检测引物，其特征在于：由正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3、正向环引物LF和反向环引物LB组成；各引物序列具体如下：FIP：5′-GGCGCAATGTGCGTTCAAAGATGAACGCAGCGAAATGCGATA-3′；BIP：5′-TTGGTATTCCATGGGGCATGCCGCGAGACAAACACCCAACA-3′；F3：5′-TCTCTTGGTTCTGGCATCGA-3′；B3：5′-TCGTTTTGAGGCGAGTCTG-3′；LF：5′-CACTGAATTCTGCAATTCACACTAC-3′；LB：5′-TGTTCGAGCGTCATTTGTACC-3′。2.权利要求1所述的LAMP检测引物在检测S.trachelii中的应用。3.一种S.trachelii的LAMP检测试剂盒，其特征在于：至少包括引物溶液和LAMP反应液；其中，引物溶液中的引物为正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3、正向环引物LF和反向环引物LB组成，各引物序列具体如下：FIP：5′-GGCGCAATGTGCGTTCAAAGATGAACGCAGCGAAATGCGATA-3′；BIP：5′-TTGGTATTCCATGGGGCATGCCGCGAGACAAACACCCAACA-3′；F3：5′-TCTCTTGGTTCTGGCATCGA-3′；B3：5′-TCGTTTTGAGGCGAGTCTG-3′；LF：5′-CACTGAATTCTGCAATTCACACTAC-3′；LB：5′-TGTTCGAGCGTCATTTGTACC-3′。4.根据权利要求3所述的S.trachelii的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述的LAMP反应液含有10×ThermoPolBuffer、MgSO4、甜菜碱、dNTPs、Bst聚合酶和显色剂HNB。5.权利要求3所述的S.trachelii的LAMP检测试剂盒在检测S.trachelii中的应用。6.一种检测S.trachelii的方法，其特征在于：提取待检菌株的DNA，以提取的DNA为模板，利用权利要求1所述的LAMP检测引物或权利要求3所述的LAMP检测试剂盒进行LAMP；观察LAMP反应溶液颜色变化，天蓝色表示检测为阳性，存在S.trachelii；紫色表示检测结果为阴性，不存在S.trachelii。2CN110172527A说明书1/7页一种S.trachelii的LAMP检测引物、检测试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明属于农作物病原菌检测、鉴定及防治技术领域，具体涉及一种Stagonosporopsistrachelii(S.trachelii)的环介导等温扩增(LAMP)检测引物、检测试剂盒及其应用，可用于S.trachelii的快速、灵敏和特异的分子检测，同时可用于S.trachelii的早期诊断和病原菌的检测和鉴定。背景技术[0002]Stagonosporopsis属的菌种大多为植物病原菌，影响许多重要农作物和观赏植物的正常生长。如S.tana