一种杜梨组培快繁方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103380730103380730B(45)授权公告日2014.11.12(21)申请号201310338402.8《PlantCellRep》.2001,第20卷第622–628页.(22)申请日2013.08.05李本波等.植物生长调节剂对杜梨组培(73)专利权人江苏省农业科学院继代苗愈伤组织发生及状态的影响.《园艺学地址210014江苏省南京市孝陵卫钟灵街报》.2009,第36卷.50号刘永富.梨砧木杜梨和BA29组培苗生根移栽(72)发明人李晓刚蔺经王中华杨青松体系研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库李慧王宏盛宝龙常有宏（电子期刊）农业科技辑》.2010,D048-27.(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所审查员夏文静(普通合伙)32204代理人肖明芳(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)A01G31/00(2006.01)(56)对比文件CN101965797B,2012.06.27,1-5.US6127182A,2000.10.03,全文.J.Kaneyoshietal.AgrobacteriumtumefaciensAKE10-mediatedtransformationofanAsianpeapear,PyrusbetulaefoliaBunge:hostspecificityofbacterialstrains.权利要求书1页权利要求书1页说明书7页说明书7页(54)发明名称一种杜梨组培快繁方法(57)摘要本发明公开了一种杜梨组培快繁方法，包括外植体的消毒、芽的诱导、试管苗增殖、愈伤组织诱导、生根诱导和炼苗移栽，在生根诱导过程中，先诱导愈伤组织，再诱导生根；获得的生根试管苗，先在三角瓶中炼苗，然后转入珍珠岩驯化炼苗，最后移栽。本发明的方法较常规方法生根率和移栽成活率高，繁殖效率高，成本低，便于推广，遗传稳定性好，适用于杜梨组培快繁。CN103380730BCN10387BCN103380730B权利要求书1/1页1.一种杜梨组培快繁方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)外植体的消毒：将杜梨带腋芽的幼茎作为外植体，切段，消毒，无菌水冲洗；(2)芽的诱导：将经上述处理的外植体切成单芽茎段，接种于不含任何外源植物激素的MS启动培养基，光照培养25～35d得到无根苗；所述的不含任何外源植物激素的MS启动培养基为：MS培养基+25～35g/L蔗糖+5.0g/L琼脂粉；(3)试管苗增殖：将无根苗接种于MS增殖培养基上，光照培养25～35d得到试管丛生苗；所述的MS增殖培养基为：MS培养基+0.3～0.6mg/L6-BA+0.1～0.6mg/LNAA+25-35g/L蔗糖+5.0g/L琼脂粉，pH5.8；(4)生根诱导：(4a)愈伤组织诱导：选取健壮的1～3cm高的试管丛生苗切分后转入愈伤组织诱导培养基中，暗培养7d，诱导产生愈伤组织；所述的愈伤组织诱导培养基为：1/2MS培养基+0.5～2.0mg/LNAA+15g/L蔗糖+5.0g/L琼脂粉，pH5.8；(4b)诱导生根：将上述获得的具有愈伤组织的试管苗，转入生根诱导培养基中，光照培养25～35d获得生根的试管植株；所述的生根诱导培养基为：1/2MS培养基+0.5～2.0mg/LIBA+15g/L蔗糖+5.0g/L琼脂粉，pH5.8；(5)炼苗移栽：向生根的试管植株三角瓶中加水5～10ml，敞口炼苗2～3天，取出组培苗，洗净培养基，每株留叶2～3片，移入泥炭和珍珠岩基质中，加盖遮阳网，继续炼苗20～25d，然后移栽定植。2.根据权利要求1所述的杜梨组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)中，对杜梨带腋芽的幼茎用流水冲洗1～2h，剪取3～4cm带芽茎段，在超净工作台上先以75％(v/v)酒精消毒30s，再用0.1％wt升汞消毒5min，无菌水漂洗4～5次。3.根据权利要求1或2所述的杜梨组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的幼茎为春季萌发的新梢幼茎。4.根据权利要求1所述的杜梨组培快繁方法，其特征在于，步骤(2)和(3)中，光照培养条件为：25±2℃、50～60μmol·m–2·s–1、12～14h/d。5.根据权利要求1所述的杜梨组培快繁方法，其特征在于，步骤(4a)中，暗培养条件为：白天温度为25±2℃，夜间温度为20±2℃；步骤(4b)中，光照培养条件为：白天温度为25±2℃，夜间温度为20±2℃，光照强度为50～60μmol·m–2·s–1，每天光照12～14h。6.根据权利要求1所述的在杜梨组培快繁生根培养中的快繁育苗方法，其特征在于，步骤(5)中，生根的试管植株生在三角瓶中，加水5～10ml，去除封口膜，先进行2～3d