一种白芨组培快繁方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109757381A(43)申请公布日2019.05.17(21)申请号201910212503.8(22)申请日2019.03.20(71)申请人丽江海贝瑞生物科技有限公司地址677000云南省丽江市玉龙纳西族自治县文峰苑小区10幢2-3号附1号(72)发明人黄帅(74)专利代理机构昆明合众智信知识产权事务所53113代理人李岿(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种白芨组培快繁方法(57)摘要本发明提供一种白芨组培快繁方法，包括以下步骤：S1：外植体的选择及预处理：以新鲜白芨茎尖或幼根为外植体；S2：不定芽的诱导：诱导培养基配方：MS培养基+1.5mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+3.5g/L蜂胶提取物+10mg/L白藜芦醇+5mg/L儿茶素+10％椰子汁+15g/L蔗糖+5g/L琼脂，PH为5.8；S3：不定芽的继代与分化；S4：分化苗的生根及驯化；S5：组培苗的移栽。本发明首次以白芨的茎尖和幼根为外植体建立组培快繁体系，相比于传统以蒴果为外植体的种子萌发过程，本发明组织培养程序不经过原球茎增殖，而直接进行丛生芽诱导，繁殖速度更快，操作更简单便捷，污染率更低，不定芽褐变率低、增殖率高。CN109757381ACN109757381A权利要求书1/1页1.一种白芨组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：外植体的选择及预处理：取新鲜白芨茎尖或幼根，清水冲洗干净后，用10％次氯酸钠溶液浸泡5-7min，期间不断搅拌，在超净工作台上，用75％酒精进行表面消毒30-60s，再转入溶菌酶溶液中消毒10-15min，用无菌水冲洗4-6次，无菌滤纸吸干表面水分待用；S2：不定芽的诱导：用解剖刀将茎尖或幼根切割成5-10mm的小段，接种至诱导培养基上，在相对湿度为68-72％、温度为23-27℃的环境下，先以红、蓝光交替光照8-12d,控制光照时间为8-10h/d,再以1600-1800lux复合光光照30-40d,控制光照时间为10-12h/d,获得白芨不定芽；所述诱导培养基配方：MS培养基+1.5mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+3.5g/L蜂胶提取物+10mg/L白藜芦醇+5mg/L儿茶素+10％椰子汁+15g/L蔗糖+5g/L琼脂，PH为5.8；S3：不定芽的继代与分化：将白芨不定芽继代至分化培养基，在相对湿度为74-78％、温度为23-27℃的环境下，以2000-2200lux复合光光照38-42d,控制光照时间为12-14h/d,进行不定芽的增殖分化培养，获得白芨分化苗；S4：分化苗的生根及驯化：选择生长长度为2.5-3cm的分化苗，剥去基部叶梢，转接至生根培养基中，在湿度为80-85％、温度为25-28℃的环境下，以2000-2400lux的复合光进行光照处理，光照时间为14-16h/d,生根培养40-45d，打开瓶盖，在室温和自然光照下，炼苗3d；所述生根培养基配方：1/2MS培养基+1/2PDA培养基+0.5mg/LIAA+0.2mg/LGA3+0.5％番茄汁+1.0mg/LIBA+0.3mg/LBR+25g/L蔗糖+5g/L琼脂，PH为5.8；S5：组培苗的移栽：将脱毒组培苗移栽到白芨专用苗床上，进行正常的水肥管理，并喷施800倍百菌清稀释液，之后每隔15d，用1:0.5:200的波尔多液和800倍百菌清稀释液交替喷施1次。2.根据权利要求1所述一种白芨组培快繁方法，其特征在于，所述溶菌酶溶液浓度为5×104-105U/ml，PH为6.0。3.根据权利要求1所述一种白芨组培快繁方法，其特征在于，所述红光和蓝光交替辐照周期为30min,辐射时间比为2：1。4.根据权利要求3所述一种白芨组培快繁方法，其特征在于，所述红光的光照强度为1000-1200Lux。5.根据权利要求3所述一种白芨组培快繁方法，其特征在于，所述蓝光的光照强度为800-1000Lux。6.根据权利要求1所述一种白芨组培快繁方法，其特征在于，所述蜂胶提取物中蜂胶黄酮的含量≥15％。7.根据权利要求1所述一种白芨组培快繁方法，其特征在于，所述分化培养基配方：1/2MS培养基+1/2PDA培养基+1.2mg/L6-BA+0.6mg/LNAA+0.2mg/LCTK+30g/L蔗糖+5g/L琼脂,PH为5.8。8.根据权利要求1所述一种白芨组培快繁方法，其特征在于，所述白芨专用苗床基质由泥炭土、腐叶土、粗椰糠、食用菌菌渣、钙镁磷肥按2:3:1:1:0.05的重量比混合而成。2CN109757381A说明书1/5页一种白芨组培快繁方法技术领域[0001]本发明属于植物组织培育技术领域，具体涉及一种白芨组培快繁方