一种用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113712994A(43)申请公布日2021.11.30(21)申请号202110797238.1A61K47/02(2006.01)(22)申请日2021.07.14A61P9/10(2006.01)(71)申请人郑州大学第一附属医院地址450052河南省郑州市二七区建设东路1号(72)发明人唐俊楠张金盈沈德良崔小林张增磊徐彦彦郭嘉城刘刚琼张力路永政秦臻(74)专利代理机构北京知呱呱知识产权代理有限公司11577代理人杜立军(51)Int.Cl.A61K35/28(2015.01)A61K9/06(2006.01)A61K47/42(2017.01)权利要求书2页说明书6页附图4页(54)发明名称一种用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶及其制备方法和应用(57)摘要一种用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶及其制备方法和应用。所述细胞外囊泡生物光敏凝胶包括细胞外囊泡、甲基丙烯酸酐化明胶和光引发剂。所述细胞外囊泡生物光敏凝胶的制备方法包括甲基丙烯酸酐化明胶的制备、细胞外囊泡的制备以及细胞外囊泡生物光敏凝胶的制备。所述细胞外囊泡生物光敏凝胶是通过喷洒和原位交联的方式来释放细胞外囊泡，以提高细胞外囊泡在损伤组织中的滞留率。将细胞外囊泡生物光敏凝胶喷洒到损伤组织表面，再用可见光照射30秒，可以实现作用效果增强的局部靶向治疗，这种策略将开启细胞外囊泡生物光敏凝胶在组织修复治疗的潜力。CN113712994ACN113712994A权利要求书1/2页1.一种用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶，其特征在于，所述细胞外囊泡生物光敏凝胶包括细胞外囊泡、甲基丙烯酸酐化明胶和光引发剂。2.根据权利要求1所述用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶，其特征在于，所述细胞外囊泡是由啮齿类的骨髓间充质基质细胞中提取而成。3.根据权利要求1所述用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶，其特征在于，所述光引发剂包括0.5mM的钌和5mM的过硫酸钠。4.权利要求1‑3任一所述用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：步骤一，甲基丙烯酸酐化明胶的制备按体积比将明胶溶解到pH＝7.3的磷酸盐缓冲液中，充分搅匀后加热至50℃；完全溶解后，加入甲基丙烯酸酐，搅拌，50℃反应1小时；反应结束后，利用MilliQ水透析净化5天，每天更换一次，最终得到的溶液即为纯化的甲基丙烯酸酐化明胶，将纯化的甲基丙烯酸酐化明胶，用0.22μm的过滤器进行过滤除菌，冻干，纯化得甲基丙烯酸酐化明胶冻干粉；步骤二，细胞外囊泡的制备1)将鼠的骨髓间充质基质细胞培养在含有10％胎牛血清的基础培养基中培养，待细胞覆盖率达80％时用pH＝7.3磷酸盐缓冲液冲洗3次，换无胎牛血清培养基，培养基中继续培养24h后，更换新的新鲜的无胎牛血清培养基继续培养48h；2)收集培养基上清液，在3000g、4℃的条件下，用5810R离心机离心15min，取离心上清液于无菌容器内，加入0.5体积的ExoQuick‑TC混匀，在4℃冷藏12h，得ExoQuick‑TC/上清液混合物；取所述ExoQuick‑TC/上清液混合物于4℃下1500g离心30min，富集得到细胞外囊泡，用pH＝7.3的磷酸盐缓冲液重悬细胞外囊泡，得含有细胞外囊泡的磷酸盐缓冲液；步骤三，细胞外囊泡生物光敏凝胶的制备将100mg的纯化的甲基丙烯酸酐化明胶冻干粉溶于1000μL超纯水中，用0.22μm的过滤器进行过滤，将过滤后的甲基丙烯酸酐化明胶与钌、过硫酸钠、含有细胞外囊泡的磷酸盐缓冲液以50:1:1:48的体积比例进行均匀混合，得细胞外囊泡生物光敏凝胶前体，在30mWcm‑2的可见光激发后即可形成细胞外囊泡生物光敏凝胶。5.根据权利要求4所述一种用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，所述按体积比是指明胶与磷酸盐缓冲液的体积比为1：10。6.根据权利要求4所述一种用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，所述加入甲基丙烯酸酐的量为每1g明胶中加入0.6g甲基丙烯酸酐。7.根据权利要求4所述一种用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶的制备方法，其特征在于，所述培养的培养条件均为5％CO2、37℃的培养箱。8.根据权利要求4所述一种用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，所述富集得到的细胞外囊泡中的蛋白总浓度为18mg/mL。9.权利要求1‑3任一所述用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶可用于制备修复损伤组织药物的应用。10.根据权利要求9所述用于修复损伤组织的细胞外囊泡生物光敏凝胶的应用，其特征在于，所