负载褪黑素细胞外囊泡及制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115006543A(43)申请公布日2022.09.06(21)申请号202210200608.3(22)申请日2022.03.01(71)申请人中国人民解放军总医院第二医学中心地址100071北京市海淀区复兴路28号(72)发明人张阳曹丰王亚斌高姗(74)专利代理机构北京天方智力知识产权代理事务所(普通合伙)11719专利代理师朱晓蕾(51)Int.Cl.A61K47/46(2006.01)A61K31/4045(2006.01)A61K35/28(2015.01)A61P9/10(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称负载褪黑素细胞外囊泡及制备方法(57)摘要本发明属于心肌损伤修复技术领域，公开了一种负载褪黑素细胞外囊泡及制备方法。制备方法包括如下步骤：获取尺寸可控的纳米细胞外囊泡，所述的纳米细胞外囊泡来自脂肪间充质干细胞；将褪黑素负载于所述的纳米细胞外囊泡得到所述的负载褪黑素细胞外囊泡。本发明的方法纳米囊泡的尺寸可控，回收率高，延长了药物半衰期。CN115006543ACN115006543A权利要求书1/1页1.一种负载褪黑素细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：获取尺寸可控的纳米细胞外囊泡，所述的纳米细胞外囊泡来自脂肪间充质干细胞；将褪黑素负载于所述的纳米细胞外囊泡得到所述的负载褪黑素细胞外囊泡。2.根据权利要求1所述的负载褪黑素细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述的获取尺寸可控的纳米细胞外囊泡通过尺寸排阻法连续挤压脂肪间充质干细胞获得。3.根据权利要求1所述的负载褪黑素细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，将褪黑素负载于所述的细胞外囊泡采用超声法。4.根据权利要求1所述的负载褪黑素细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述的脂肪间充质干细胞经原代提取和培养后，洗涤、收集，然后以至少1×106个细胞/ml的浓度悬浮在PBS中。5.根据权利要求2所述的负载褪黑素细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述的尺寸排阻法为使用挤出机将细胞悬浮液依次挤出1μm、400nm和200nm聚碳酸酯膜，挤出五到六次。6.根据权利要求1所述的负载褪黑素细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述的将褪黑素负载于所述的纳米细胞外囊泡具体包括如下步骤：将褪黑素溶液混入纳米细胞外囊泡中，并使用超声波对混悬液进行处理；超声处理后，培养以恢复纳米囊泡膜，形成负载褪黑素细胞外囊泡。7.根据权利要求6所述的负载褪黑素细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，形成负载褪黑素细胞外囊泡后还包括步骤除去过量的游离褪黑素。8.一种负载褪黑素细胞外囊泡，其特征在于，所述的负载褪黑素细胞外囊泡由权利要求1‑7任一项所述的制备方法制备而得。2CN115006543A说明书1/4页负载褪黑素细胞外囊泡及制备方法技术领域[0001]本发明涉及心肌损伤修复技术领域，具体涉及一种负载褪黑素细胞外囊泡及制备方法。背景技术[0002]本发明对于背景技术的描述属于与本发明相关的相关技术，仅仅是用于说明和便于理解本发明的发明内容，不应理解为申请人明确认为或推定申请人认为是本发明在首次提出申请的申请日的现有技术。[0003]心肌梗死(MI)是缺血性心脏病(IHD)的一种，是全世界残疾和死亡的主要原因。心肌损伤是导致心肌梗死的最重要因素。[0004]针对药物在体内递送的问题，由于药物在体内的半衰期比较低，影响实际治疗效果，会产生副作用。因此，已经开发出各种纳米给药载体来携带药物并将其运送到受伤部位。不幸的是，由于纳米载体的免疫原性和毒性、低载药量和生物分布问题，纳米载体在药物递送中的应用受到限制。发明内容[0005]本发明实施例的目的是提供一种负载褪黑素细胞外囊泡及制备方法，本发明的方法纳米囊泡的尺寸可控，回收率高，延长了药物半衰期。[0006]本发明实施例的目的是通过如下技术方案实现的：[0007]一种负载褪黑素细胞外囊泡的制备方法，包括如下步骤：[0008]获取尺寸可控的纳米细胞外囊泡，所述的纳米细胞外囊泡来自脂肪间充质干细胞；[0009]将褪黑素负载于所述的纳米细胞外囊泡得到所述的负载褪黑素细胞外囊泡。[0010]进一步的，所述的获取尺寸可控的纳米细胞外囊泡通过尺寸排阻法连续挤压脂肪间充质干细胞获得。[0011]进一步的，将褪黑素负载于所述的细胞外囊泡采用超声法。[0012]进一步的，所述的脂肪间充质干细胞经原代提取和培养后，洗涤、收集，然后以至少1×106个细胞/ml的浓度悬浮在PBS中。[0013]进一步的，所述的尺寸排阻法为使用挤出机将细胞悬浮液依次挤出1μm、400nm和200nm聚碳酸酯膜，挤出五到六次。[0014]进一步的，所述的将褪黑素负载于所述的纳米细胞外囊泡具体包括如下步骤：将褪黑素