突变的HEV多肽及其用于测定抗HEV抗体的用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108473540A(43)申请公布日2018.08.31(21)申请号201680079160.7(74)专利代理机构永新专利商标代理有限公司720(22)申请日2016.11.2902代理人王健(30)优先权数据15615962015.11.30FR(51)Int.Cl.C07K14/08(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日G01N33/576(2006.01)2018.07.17C07K14/005(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/FR2016/0531272016.11.29(87)PCT国际申请的公布数据WO2017/093649FR2017.06.08(71)申请人生物梅里埃公司地址法国迈合西-兰托阿嘞(72)发明人Y·阿塔曼-厄纳尔S·达尼埃尔N·古塔尼F·卢西亚尼权利要求书2页说明书23页序列表83页附图22页(54)发明名称突变的HEV多肽及其用于测定抗HEV抗体的用途(57)摘要本发明涉及戊型肝炎病毒p-ORF2蛋白的多肽，其包含至少氨基酸序列394-660(相对于660个氨基酸的p-ORF2蛋白编号)，其中位置627、630和638的三个半胱氨酸已经被突变，或对于不同长度的p-ORF2蛋白，至少对应于660个氨基酸的p-ORF2蛋白的氨基酸394-660的氨基酸序列，其中位于对应于660个氨基酸的p-ORF2蛋白的位置627、630和638的三个位置的三个半胱氨酸已被突变。本发明还涉及使用这些多肽测定针对p-ORF2蛋白的体液应答的存在或抗体效价的方法，还涉及其在感染戊型肝炎病毒的情况中的用途。无附图。CN108473540ACN108473540A权利要求书1/2页1.戊型肝炎病毒的p-ORF2蛋白的多肽，其至少包含相对于660个氨基酸的p-ORF2蛋白编号的氨基酸序列394-660，其中位置627、630和638的三个半胱氨酸已被突变，或者对于不同长度的p-ORF2蛋白，其至少包含对应于660个氨基酸的p-ORF2蛋白的氨基酸394-660的氨基酸序列，其中位于对应于660个氨基酸的p-ORF2蛋白的位置627、630和638的三个位置的三个半胱氨酸已被突变。2.权利要求1的多肽，其特征在于所述突变通过用除了脯氨酸、侧链带电荷的氨基酸以及侧链包含芳香族苯环的氨基酸以外的任何氨基酸置换所述三个半胱氨酸来进行。3.权利要求1或2的多肽，其特征在于所述突变通过用选自丙氨酸、甘氨酸、苏氨酸、缬氨酸和丝氨酸的氨基酸置换所述三个半胱氨酸来进行。4.权利要求1至3中任一项的多肽，其特征在于所述突变包含用相同的氨基酸取代所述半胱氨酸。5.权利要求4的多肽，其特征在于所述突变通过用丝氨酸取代所述三个半胱氨酸来进行。6.前述权利要求中任一项的多肽，其特征在于它由相对于660个氨基酸的p-ORF2蛋白编号的氨基酸序列394-660的多肽组成，其中位置627、630和638的三个半胱氨酸已被突变，或者对于不同长度的p-ORF2蛋白，其由对应于660个氨基酸的p-ORF2蛋白的氨基酸394-660的氨基酸序列的多肽组成，其中位于对应于660个氨基酸的p-ORF2蛋白的位置627、630和638的三个位置的三个半胱氨酸已被突变。7.前述权利要求中任一项的多肽，其特征在于其还包含一个或多个不属于所述p-ORF2蛋白的氨基酸，或者特征在于其被标记。8.一种分离的核酸，其包含编码权利要求1至7中任一项所定义的多肽的核苷酸序列或与所述编码序列互补的序列。9.一种表达载体，其包含权利要求8所定义的核酸序列。10.一种宿主细胞，其包含编码权利要求1至7中任一项所定义的多肽的核苷酸序列，或与所述编码序列互补的序列，或权利要求9所定义的表达载体。11.一种通过免疫测定测定来自可能含有针对戊型肝炎病毒p-ORF2蛋白抗体应答的抗体的对象的生物样品中所述抗体应答的存在的方法，所述方法包括以下步骤：-使所述生物样品与权利要求1至7中任一项所定义的多肽接触，-如果所述抗体存在，使用能够发出可检测信号的标签检测由所述多肽和所述抗体之间的结合发出的信号，-比较如此获得的信号与预先测定的两个群体对照的参考信号S，一个群体已经发展出所述抗体，而另一群体未发展出所述抗体，-低于所述参考信号S的信号表示样品不含所述抗体，-高于所述参考信号S的信号表示样品含有所述抗体。12.一种通过免疫测定测定来自可能含有针对戊型肝炎病毒的p-ORF2蛋白的抗体的对象的生物样品中所述抗体的效价的方法，所述方法包括以下步骤：-使所述生物样品与权利要求1至7中任一项所定义的多肽接触，-如果所述抗体存在，使用能够发出可检测信号的标签检测由所述多肽和所述抗体之间的结合发出