预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲,该文档总共16页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111235102A(43)申请公布日2020.06.05(21)申请号202010224533.3(22)申请日2020.03.26(71)申请人苏州梅赛生物技术有限公司地址215000江苏省苏州市吴江区吴江经济技术开发区顺风路东侧、思贤路南侧(72)发明人练春频张万明朱锋林(74)专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350代理人汤东凤(51)Int.Cl.C12N5/0775(2010.01)权利要求书1页说明书9页附图5页(54)发明名称一种脐带间充质干细胞原代培养方法(57)摘要本发明提供了一种全新的从脐带华通氏胶中分离获得大量脐带间充质干细胞的方法。本发明方法使用HeliosUltraGRO间充质干细胞培养补充剂,原代细胞培养所用的细胞培养皿预先用20μg/mL弹性蛋白原(tropoelastin,TE)包被处理过。本发明方法能显著提高脐带间充质干细胞原代细胞产量的方法。本发明方法通过分离华通氏胶,经HeliosUltraGRO间充质干细胞培养补充剂孵育后再贴壁培养于用弹性蛋白原包被处理过的细胞培养皿。与现有的分离方法相比,本发明所提供的改进方法能显著增加原代细胞的产量,在相同培养时间下能获得更多的原代细胞。CN111235102ACN111235102A权利要求书1/1页1.脐带间充质干细胞原代培养方法,其特征在于,所述脐带间充质干细胞原代培养方法使用HeliosUltraGRO间充质干细胞培养补充剂,并且原代细胞培养所用的细胞培养皿预先用弹性蛋白原包被处理。2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞原代培养方法,其特征在于,所述脐带间充质干细胞原代培养方法中所述的HeliosUltraGRO间充质干细胞培养补充剂的使用方法如下:所述脐带间充质干细胞原代培养方法中华通氏胶切成长条后放入HeliosUltraGRO间充质干细胞培养补充剂中孵育4小时。3.根据权利要求2所述的脐带间充质干细胞原代培养方法,其特征在于,所述使用的细胞培养皿预先用弹性蛋白原包被处理的方法如下:脐带间充质干细胞原代培养方法中细胞培养皿预先用20μg/mL弹性蛋白原包被处理,4℃放置过夜。4.根据权利要求3所述的脐带间充质干细胞原代培养方法,其特征在于,所述脐带间充质干细胞原代培养方法中华通氏胶切成小块后接种于包被好的细胞培养皿中,采用组织贴壁法培养脐带间充质干细胞。5.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞原代培养方法,其特征在于,所述脐带间充质干细胞原代培养方法包含如下步骤:步骤(1)获取新生儿脐带,取组织保存液进行无菌和支原体检测后,用生理盐水清洗多次直至洗去脐带中残留的血液;步骤(2)将步骤(1)获得的脐带找出并剔除脐带中的静脉血管和动脉血管,分离华通氏胶并用生理盐水充分洗涤华通氏胶;步骤(3)将华通氏胶切成长条,把切好的华通氏胶长条放入HeliosUltraGRO间充质干细胞培养补充剂中孵育4小时;步骤(4)将步骤(3)中孵育过的华通氏胶长条用生理盐水洗3次,剪成小块(长宽均为2mm);步骤(5)细胞培养皿预先用20μg/mL弹性蛋白原包被处理,4℃放置过夜,将步骤(4)中的华通氏胶小块接种于包被好的细胞培养皿中,采用组织贴壁法培养脐带间充质干细胞;步骤(6)组织培养获得原代脐带间充质干细胞。6.根据权利要求5所述的脐带间充质干细胞原代培养方法,其特征在于,所述脐带间充质干细胞原代培养方法中使用的培养基为MEMα完全培养基,所述MEMα完全培养基制备方法为:MEMα基础培养基(体积百分比为95%),HeliosUltraGRO间充质干细胞培养补充剂(体积百分比为5%),配置完成后再添加肝素使其浓度达到2IU/mL。7.根据权利要求5所述的脐带间充质干细胞原代培养方法,其特征在于,所述的脐带间充质干细胞原代培养方法中原代细胞计数采用血球计数板计数法、原代细胞染色采用结晶紫染色液染色。2CN111235102A说明书1/9页一种脐带间充质干细胞原代培养方法技术领域[0001]本发明属于细胞生物学领域,特别涉及间充质干细胞培养。背景技术[0002]脐带间充质干细胞是可应用于再生医学领域和治疗系统性疾病的“实用型干细胞”。因其取材方便,无道德伦理争议,可获取的细胞数量多、活力强,便于扩增,没有配型和排异等问题而成为理想的种子细胞来源,适合于临床研究和应用。脐带间充质干细胞的研究虽然起步相对较晚,但进展迅速,是干细胞转化医学研究中最具发展前景的领域之一。利用脐带间充质干细胞的分化特性,预计在临床上可用于治疗各种涉及组织细胞变性、坏死、缺失引起的组织损伤退变类疾病等。[0003]脐带间充质干细胞原代分离培养方法分为酶消化法和组织块贴壁培养法。酶消化法主要使